现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2007年
2期
14-17
,共4页
何文亮%杜孟刚%赵育英%李亚萍%张美萍
何文亮%杜孟剛%趙育英%李亞萍%張美萍
하문량%두맹강%조육영%리아평%장미평
白色念珠菌%抗体%PCR%重组基因
白色唸珠菌%抗體%PCR%重組基因
백색념주균%항체%PCR%중조기인
目的 应用PCR方法从人血中克隆抗白色念珠菌抗体重链(VH)和轻链(VL,VK)可变区基因,重组到PGEM-llzf(+)载体中,为构建抗白色念珠菌抗体库奠定基础.方法 设计7条VHbank primer(5')和6条For primers(3')引物,9条VL bank primer(5')和2条For primers(3')引物,4条VK bank primer(5')和4条For primers(3')引物.从45名念珠菌病恢复期患者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL,VK)可变区基因.通过于linker链两端引入酶切位点,经T4DNA连接酶连接成完整的基因片段并重组到pgem-llzf(+)载体中.结果 经PCR方法扩增出了7条VH、9条VL和4条VK片断,经测序证实扩增片断全部为抗体可变区基因.经linker连接入pgem-llzf(+)载体中,获得完整的重组基因.结论 获得了全人源抗白色念珠菌单链抗体基因,为构建抗白色念珠菌抗体库奠定基础,也为研发有效治疗白色念珠菌和耐药性白色念珠菌的感染的药物提供了新的手段.
目的 應用PCR方法從人血中剋隆抗白色唸珠菌抗體重鏈(VH)和輕鏈(VL,VK)可變區基因,重組到PGEM-llzf(+)載體中,為構建抗白色唸珠菌抗體庫奠定基礎.方法 設計7條VHbank primer(5')和6條For primers(3')引物,9條VL bank primer(5')和2條For primers(3')引物,4條VK bank primer(5')和4條For primers(3')引物.從45名唸珠菌病恢複期患者的外週血淋巴細胞中提取總RNA,用RT-PCR方法擴增人抗體重鏈(VH)和輕鏈(VL,VK)可變區基因.通過于linker鏈兩耑引入酶切位點,經T4DNA連接酶連接成完整的基因片段併重組到pgem-llzf(+)載體中.結果 經PCR方法擴增齣瞭7條VH、9條VL和4條VK片斷,經測序證實擴增片斷全部為抗體可變區基因.經linker連接入pgem-llzf(+)載體中,穫得完整的重組基因.結論 穫得瞭全人源抗白色唸珠菌單鏈抗體基因,為構建抗白色唸珠菌抗體庫奠定基礎,也為研髮有效治療白色唸珠菌和耐藥性白色唸珠菌的感染的藥物提供瞭新的手段.
목적 응용PCR방법종인혈중극륭항백색념주균항체중련(VH)화경련(VL,VK)가변구기인,중조도PGEM-llzf(+)재체중,위구건항백색념주균항체고전정기출.방법 설계7조VHbank primer(5')화6조For primers(3')인물,9조VL bank primer(5')화2조For primers(3')인물,4조VK bank primer(5')화4조For primers(3')인물.종45명념주균병회복기환자적외주혈림파세포중제취총RNA,용RT-PCR방법확증인항체중련(VH)화경련(VL,VK)가변구기인.통과우linker련량단인입매절위점,경T4DNA련접매련접성완정적기인편단병중조도pgem-llzf(+)재체중.결과 경PCR방법확증출료7조VH、9조VL화4조VK편단,경측서증실확증편단전부위항체가변구기인.경linker련접입pgem-llzf(+)재체중,획득완정적중조기인.결론 획득료전인원항백색념주균단련항체기인,위구건항백색념주균항체고전정기출,야위연발유효치료백색념주균화내약성백색념주균적감염적약물제공료신적수단.
