科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2006年
6期
746-750
,共5页
赵玮钦%陈苏民%陈南春%王涛%秦云%关露媛%张晓楠
趙瑋欽%陳囌民%陳南春%王濤%秦雲%關露媛%張曉楠
조위흠%진소민%진남춘%왕도%진운%관로원%장효남
人骨形成蛋白2成熟肽%高密度发酵%大规模蛋白质纯化%尿素
人骨形成蛋白2成熟肽%高密度髮酵%大規模蛋白質純化%尿素
인골형성단백2성숙태%고밀도발효%대규모단백질순화%뇨소
为大规模制备rhBMP-2m,将高表达rhBMP-2m的工程菌株进行高密度发酵、温度诱导表达,收集菌体,经裂菌和超声洗涤得到并纯化的包涵体.洗涤后的包涵体中,rhBMP-2m占蛋白量的75.1%.为获得高纯度的rhBMP-2m,采用尿素作变性剂将包涵体溶解,经SP-Sepharose FF柱和Q-Sepharose FF柱两步纯化.rhBMP-2m包涵体经pH6.5尿素溶解后,经SP-Sepharose FF柱纯化,蛋白纯度为91%;若rhBMP-2m在碱性尿素中作用时间超过48 h,再经Q-Sepharose FF柱纯化后,纯化产物中在还原性SDS-PAGE中会出现少量与rhBMP-2m二聚体大小接近的蛋白带,显示出碱性尿素对rhBMP-2m的共价修饰作用,会严重地影响rhBMP-2m的纯化效果和活性;若24 h内完成分离纯化则影响较小,纯化后rhBMP-2m单体的纯度达98%以上.本研究表明尿素适合rhBMP-2m包涵体的大规模纯化.文章对使用尿素的利弊进行了讨论,提出大规模制备蛋白质时最好避免在碱性环境使用高浓度尿素.
為大規模製備rhBMP-2m,將高錶達rhBMP-2m的工程菌株進行高密度髮酵、溫度誘導錶達,收集菌體,經裂菌和超聲洗滌得到併純化的包涵體.洗滌後的包涵體中,rhBMP-2m佔蛋白量的75.1%.為穫得高純度的rhBMP-2m,採用尿素作變性劑將包涵體溶解,經SP-Sepharose FF柱和Q-Sepharose FF柱兩步純化.rhBMP-2m包涵體經pH6.5尿素溶解後,經SP-Sepharose FF柱純化,蛋白純度為91%;若rhBMP-2m在堿性尿素中作用時間超過48 h,再經Q-Sepharose FF柱純化後,純化產物中在還原性SDS-PAGE中會齣現少量與rhBMP-2m二聚體大小接近的蛋白帶,顯示齣堿性尿素對rhBMP-2m的共價脩飾作用,會嚴重地影響rhBMP-2m的純化效果和活性;若24 h內完成分離純化則影響較小,純化後rhBMP-2m單體的純度達98%以上.本研究錶明尿素適閤rhBMP-2m包涵體的大規模純化.文章對使用尿素的利弊進行瞭討論,提齣大規模製備蛋白質時最好避免在堿性環境使用高濃度尿素.
위대규모제비rhBMP-2m,장고표체rhBMP-2m적공정균주진행고밀도발효、온도유도표체,수집균체,경렬균화초성세조득도병순화적포함체.세조후적포함체중,rhBMP-2m점단백량적75.1%.위획득고순도적rhBMP-2m,채용뇨소작변성제장포함체용해,경SP-Sepharose FF주화Q-Sepharose FF주량보순화.rhBMP-2m포함체경pH6.5뇨소용해후,경SP-Sepharose FF주순화,단백순도위91%;약rhBMP-2m재감성뇨소중작용시간초과48 h,재경Q-Sepharose FF주순화후,순화산물중재환원성SDS-PAGE중회출현소량여rhBMP-2m이취체대소접근적단백대,현시출감성뇨소대rhBMP-2m적공개수식작용,회엄중지영향rhBMP-2m적순화효과화활성;약24 h내완성분리순화칙영향교소,순화후rhBMP-2m단체적순도체98%이상.본연구표명뇨소괄합rhBMP-2m포함체적대규모순화.문장대사용뇨소적리폐진행료토론,제출대규모제비단백질시최호피면재감성배경사용고농도뇨소.
