草苷膦抗性新基因的克隆、序列分析及其蛋白高级结构预测
초감련항성신기인적극륭、서렬분석급기단백고급결구예측
Cloning, Sequencing and Protein Tertiary Structure Prediction of a Novel EPSPs-encoding Gene with High Glyphosate Tolerance
  • 万方数据
    中国生物化学与分子生物学报 중국생물화학여분자생물학보
    CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
    2006年 3期 197-203 ,共7页

    刘光全%刘柱%陆伟%徐玉泉%梁爱敏%平淑珍%张维%陈明%林敏

    류광전%류주%륙위%서옥천%량애민%평숙진%장유%진명%림민

    EPSP合酶新基因%错误倾向PCR%草苷膦抗性%蛋白高级结构预测%扭转角%蛋白中心骨架比较预测 EPSP閤酶新基因%錯誤傾嚮PCR%草苷膦抗性%蛋白高級結構預測%扭轉角%蛋白中心骨架比較預測
    EPSP합매신기인%착오경향PCR%초감련항성%단백고급결구예측%뉴전각%단백중심골가비교예측
    利用错误倾向PCR(error-prone PCR)突变技术,以可变盐单胞菌(Halomonas variabilis)HTG7的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶基因为模板进行随机PCR扩增,得到目的基因片段(约1.35kb).将该基因片段与pACYC184载体连接后转化EPSP合酶缺陷型菌株大肠杆菌ER2799.利用功能互补筛选法得到了2株不具有草苷膦抗性的EPSP合酶阳性克隆突变株,记为Pmu1和Pmu2.序列分析表明,突变体Pum1的EPSP合酶编码区与突变前基因相比,核苷酸有2处发生突变,导致氨基酸残基1处发生了改变;突变体Pmu2的EPSP合酶编码区与突变前基因相比,核苷酸有5处发生突变,导致氨基酸残基2处发生了改变.对突变前后EPSP合酶进行比较预测发现,其三级结构及蛋白中心骨架是大致相同的,但突变前后氨基酸位点肽平面和Cα相连的N键之间形成的扭转角度存在一定的差别.这些结果表明,酶的功能主要由蛋白的构象决定,二肽链形成后肽平面和N键之间角度的变化,造成高级结构构象细微的差别,致使草苷膦抗性功能丢失.
    이용착오경향PCR(error-prone PCR)돌변기술,이가변염단포균(Halomonas variabilis)HTG7적5-희순병동망초산-3-린산(EPSP)합매기인위모판진행수궤PCR확증,득도목적기인편단(약1.35kb).장해기인편단여pACYC184재체련접후전화EPSP합매결함형균주대장간균ER2799.이용공능호보사선법득도료2주불구유초감련항성적EPSP합매양성극륭돌변주,기위Pmu1화Pmu2.서렬분석표명,돌변체Pum1적EPSP합매편마구여돌변전기인상비,핵감산유2처발생돌변,도치안기산잔기1처발생료개변;돌변체Pmu2적EPSP합매편마구여돌변전기인상비,핵감산유5처발생돌변,도치안기산잔기2처발생료개변.대돌변전후EPSP합매진행비교예측발현,기삼급결구급단백중심골가시대치상동적,단돌변전후안기산위점태평면화Cα상련적N건지간형성적뉴전각도존재일정적차별.저사결과표명,매적공능주요유단백적구상결정,이태련형성후태평면화N건지간각도적변화,조성고급결구구상세미적차별,치사초감련항성공능주실.
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