生理学报
生理學報
생이학보
ACTA PHYSIOLOGICA SINICA
2005年
4期
480-485
,共6页
王淑一%宋峣%徐明%郝天袍%韩启德%张幼怡
王淑一%宋峣%徐明%郝天袍%韓啟德%張幼怡
왕숙일%송요%서명%학천포%한계덕%장유이
α1-肾上腺素受体%分布%定位%细胞株
α1-腎上腺素受體%分佈%定位%細胞株
α1-신상선소수체%분포%정위%세포주
为了明确α1-肾上腺素受体(α1-adrenergic receptor,α1-AR)三种亚型在人胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)293A细胞株中的分布特点,及其在激动剂作用下在细胞内的定位改变,本研究采用放射配体结合实验、实时荧光共聚焦成像和Western blot方法检测α1-AR三种亚型在细胞中的定位及蛋白质表达的变化.结果发现:(1)α1-AR三种亚型在HEK293A细胞株转染效率相同,均达90%以上.三株细胞的粗制膜上α1B-AR表达量最高,α1D-AR最低,α1A-AR居中,但三者的解离常数(Kd)相等;(2)在无激动剂作用时,α1A-AR均匀地分布在HEK293A细胞的胞膜和胞浆,α1B-AR主要位于胞膜,而α1D-AR则主要分布在胞浆中;(3)用α1-AR激动剂苯肾上腺素(phenylephrine,PE)刺激细胞1 h后,α1A-和α1B-AR在胞膜上分布明显减少,而在胞浆中分布增加,其中α1B-AR变化更为显著,α1D-AR的分布在PE作用下无明显变化.以上结果提示,在激动剂作用下,α1-AR三种亚型在HEK293A细胞中的定位特点和分布变化各有不同.
為瞭明確α1-腎上腺素受體(α1-adrenergic receptor,α1-AR)三種亞型在人胚胎腎(human embryonic kidney,HEK)293A細胞株中的分佈特點,及其在激動劑作用下在細胞內的定位改變,本研究採用放射配體結閤實驗、實時熒光共聚焦成像和Western blot方法檢測α1-AR三種亞型在細胞中的定位及蛋白質錶達的變化.結果髮現:(1)α1-AR三種亞型在HEK293A細胞株轉染效率相同,均達90%以上.三株細胞的粗製膜上α1B-AR錶達量最高,α1D-AR最低,α1A-AR居中,但三者的解離常數(Kd)相等;(2)在無激動劑作用時,α1A-AR均勻地分佈在HEK293A細胞的胞膜和胞漿,α1B-AR主要位于胞膜,而α1D-AR則主要分佈在胞漿中;(3)用α1-AR激動劑苯腎上腺素(phenylephrine,PE)刺激細胞1 h後,α1A-和α1B-AR在胞膜上分佈明顯減少,而在胞漿中分佈增加,其中α1B-AR變化更為顯著,α1D-AR的分佈在PE作用下無明顯變化.以上結果提示,在激動劑作用下,α1-AR三種亞型在HEK293A細胞中的定位特點和分佈變化各有不同.
위료명학α1-신상선소수체(α1-adrenergic receptor,α1-AR)삼충아형재인배태신(human embryonic kidney,HEK)293A세포주중적분포특점,급기재격동제작용하재세포내적정위개변,본연구채용방사배체결합실험、실시형광공취초성상화Western blot방법검측α1-AR삼충아형재세포중적정위급단백질표체적변화.결과발현:(1)α1-AR삼충아형재HEK293A세포주전염효솔상동,균체90%이상.삼주세포적조제막상α1B-AR표체량최고,α1D-AR최저,α1A-AR거중,단삼자적해리상수(Kd)상등;(2)재무격동제작용시,α1A-AR균균지분포재HEK293A세포적포막화포장,α1B-AR주요위우포막,이α1D-AR칙주요분포재포장중;(3)용α1-AR격동제분신상선소(phenylephrine,PE)자격세포1 h후,α1A-화α1B-AR재포막상분포명현감소,이재포장중분포증가,기중α1B-AR변화경위현저,α1D-AR적분포재PE작용하무명현변화.이상결과제시,재격동제작용하,α1-AR삼충아형재HEK293A세포중적정위특점화분포변화각유불동.
