生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2003年
4期
402-406
,共5页
重组金黄色葡萄球菌肠毒素A%基因克隆%可溶表达%活性分析
重組金黃色葡萄毬菌腸毒素A%基因剋隆%可溶錶達%活性分析
중조금황색포도구균장독소A%기인극륭%가용표체%활성분석
利用PCR从金黄色葡萄球菌标准株(Staphylococcus aureus, ATCC13565)中克隆了金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的基因,序列测定结果与报道完全一致.构建了表达载体pET-SEA并获得高效表达,重组蛋白(rSEA)在37℃诱导时以包涵体形式存在,降低温度则出现可溶表达,可溶性rSEA占总rSEA的55%.可溶性rSEA经Ni2+亲和层析纯化,达电泳纯.通过同源模建对rSEA对SEA进行结构比较,结果表明尽管rSEA比野生型SEA多了9个氨基酸但其结构并没有明显的变化.单核细胞增殖试验进一步证明了该结论:将rSEA与SEA同外周血单个核细胞共同培养,两者均能有效地促进其增殖.将rSEA与体内激活的脾细胞共培养,则能增强脾细胞的体外抑瘤活性.
利用PCR從金黃色葡萄毬菌標準株(Staphylococcus aureus, ATCC13565)中剋隆瞭金黃色葡萄毬菌腸毒素A(SEA)的基因,序列測定結果與報道完全一緻.構建瞭錶達載體pET-SEA併穫得高效錶達,重組蛋白(rSEA)在37℃誘導時以包涵體形式存在,降低溫度則齣現可溶錶達,可溶性rSEA佔總rSEA的55%.可溶性rSEA經Ni2+親和層析純化,達電泳純.通過同源模建對rSEA對SEA進行結構比較,結果錶明儘管rSEA比野生型SEA多瞭9箇氨基痠但其結構併沒有明顯的變化.單覈細胞增殖試驗進一步證明瞭該結論:將rSEA與SEA同外週血單箇覈細胞共同培養,兩者均能有效地促進其增殖.將rSEA與體內激活的脾細胞共培養,則能增彊脾細胞的體外抑瘤活性.
이용PCR종금황색포도구균표준주(Staphylococcus aureus, ATCC13565)중극륭료금황색포도구균장독소A(SEA)적기인,서렬측정결과여보도완전일치.구건료표체재체pET-SEA병획득고효표체,중조단백(rSEA)재37℃유도시이포함체형식존재,강저온도칙출현가용표체,가용성rSEA점총rSEA적55%.가용성rSEA경Ni2+친화층석순화,체전영순.통과동원모건대rSEA대SEA진행결구비교,결과표명진관rSEA비야생형SEA다료9개안기산단기결구병몰유명현적변화.단핵세포증식시험진일보증명료해결론:장rSEA여SEA동외주혈단개핵세포공동배양,량자균능유효지촉진기증식.장rSEA여체내격활적비세포공배양,칙능증강비세포적체외억류활성.
