CAJ | 학술논문

利用五指山小型猪近交系不同发育阶段的早期胚胎为材料,探索猪胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)培养、分离、传代的影响因素,以选择猪胚胎干细胞建系的适宜条件.收集五指山猪第5～10 d胚胎(配种当天记为0 d),以STO细胞[STO细胞是来自SIM小鼠(S)胚胎对硫代鸟嘌呤(thioguanine,T)和乌本苷(ouabain,O)有抗性的成纤维细胞系]为饲养层,分别采用两种培养液:杜氏培养液(Dulbecco's modified eagle medium,DMEM)+10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)+10%新生牛血清(newborn bovine serum,NBS)+1 000IU/mL白血病抑制因子(1eukemia inhibitory factor,LIF)+30 ng/mL干细胞生长因子(stem cell growthfactor,SCF)+20 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)或DMEM+10%NBS+10%FBS+1 000IU/mL LIF+30 ng/mL SCF.比较发现,培养液中是否加入bFGF对胚胎干细胞的培养无显著影响;实验共收集胚胎124枚,其中D5～6胚胎18枚,胚胎贴壁率为68.8%,内细胞团出现率为6.3%,未能传代;收集D7孵化囊胚27枚,贴壁率为100%,内细胞团出现率为38.9%,传代1次失败;D9胚胎18枚,贴壁率为100%,传代后ES细胞生长较缓慢;收集D10胚胎52枚,胚胎贴壁率为100%,传代率为100%,传代后可出现ES细胞克隆点;实验过程中比较了胚径对干细胞培养的影响,发现胚径越大,培养效果越好,胚径大于100μm,分离ICM后出现干细胞集落成功率达100%,并得到了AP染色呈阳性的传4代的ES细胞集落.
이용오지산소형저근교계불동발육계단적조기배태위재료,탐색저배태간세포(embryonic stem cells,ES)배양、분리、전대적영향인소,이선택저배태간세포건계적괄의조건.수집오지산저제5～10 d배태(배충당천기위0 d),이STO세포[STO세포시래자SIM소서(S)배태대류대조표령(thioguanine,T)화오본감(ouabain,O)유항성적성섬유세포계]위사양층,분별채용량충배양액:두씨배양액(Dulbecco's modified eagle medium,DMEM)+10%태우혈청(fetal bovine serum,FBS)+10%신생우혈청(newborn bovine serum,NBS)+1 000IU/mL백혈병억제인자(1eukemia inhibitory factor,LIF)+30 ng/mL간세포생장인자(stem cell growthfactor,SCF)+20 ng/mL감성성섬유세포생장인자(basic fibroblast growth factor,bFGF)혹DMEM+10%NBS+10%FBS+1 000IU/mL LIF+30 ng/mL SCF.비교발현,배양액중시부가입bFGF대배태간세포적배양무현저영향;실험공수집배태124매,기중D5～6배태18매,배태첩벽솔위68.8%,내세포단출현솔위6.3%,미능전대;수집D7부화낭배27매,첩벽솔위100%,내세포단출현솔위38.9%,전대1차실패;D9배태18매,첩벽솔위100%,전대후ES세포생장교완만;수집D10배태52매,배태첩벽솔위100%,전대솔위100%,전대후가출현ES세포극륭점;실험과정중비교료배경대간세포배양적영향,발현배경월대,배양효과월호,배경대우100μm,분리ICM후출현간세포집락성공솔체100%,병득도료AP염색정양성적전4대적ES세포집락.