CAJ | 학술논문

用抑制性差减杂交结合SMARTcDNA合成和RACE-PCR技术的综合方法,从鱼类卵母细胞卵黄形成后期差减文库中克隆到一个新的含WD结构域蛋白的基因.该基因cDNA全长为1870bp,可读框长990bp,编码的蛋白质由329个氨基酸组成,含有6个WD结构域;5＇非编码区长210bp,3＇非编码区长670bp,有脊椎动物典型的ANNATG起始序列和polyA加尾信号AATAAA.由于其编码的蛋白质与STRAP蛋白(serine-threoninekinase receptor-associated protein)有92%的同源性,所以把它称为FSTRAP(fishSTRAP).虚拟Northern杂交表明,FSTRAP在卵母细胞的卵黄形成后期表达,而在卵黄形成前期(Ⅰ时相卵母细胞)不表达.各种组织的RT-PCR显示,FSTRAP在摘、心、肾、肌肉、卵巢、脾和精巢有转录,而在肝脏中未见扩增带.不同发育时相卵母细胞的RT-PCR表明,FSTRAP在第Ⅱ～V时相都有转录.Western杂交也显示FSTRAP在除肝组织外的多种组织中都表达,与RT-PCR结果相同,FSTRAP在卵黄形成前期几乎不表达,从第Ⅱ时相开始表达,且与其转录水平一致.
용억제성차감잡교결합SMARTcDNA합성화RACE-PCR기술적종합방법,종어류란모세포란황형성후기차감문고중극륭도일개신적함WD결구역단백적기인.해기인cDNA전장위1870bp,가독광장990bp,편마적단백질유329개안기산조성,함유6개WD결구역;5＇비편마구장210bp,3＇비편마구장670bp,유척추동물전형적ANNATG기시서렬화polyA가미신호AATAAA.유우기편마적단백질여STRAP단백(serine-threoninekinase receptor-associated protein)유92%적동원성,소이파타칭위FSTRAP(fishSTRAP).허의Northern잡교표명,FSTRAP재란모세포적란황형성후기표체,이재란황형성전기(Ⅰ시상란모세포)불표체.각충조직적RT-PCR현시,FSTRAP재적、심、신、기육、란소、비화정소유전록,이재간장중미견확증대.불동발육시상란모세포적RT-PCR표명,FSTRAP재제Ⅱ～V시상도유전록.Western잡교야현시FSTRAP재제간조직외적다충조직중도표체,여RT-PCR결과상동,FSTRAP재란황형성전기궤호불표체,종제Ⅱ시상개시표체,차여기전록수평일치.