复旦学报（自然科学版）
複旦學報（自然科學版）
복단학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2000年
3期
273-276
,共4页
季朝能%姜涛%殷长传%陈民勤%金(龙言)%张志鸿%毛裕民
季朝能%薑濤%慇長傳%陳民勤%金(龍言)%張誌鴻%毛裕民
계조능%강도%은장전%진민근%금(룡언)%장지홍%모유민
甲硒氨酸多波长反常散射法%耐热邻苯二酚2,3双加氧酶%表达%纯化
甲硒氨痠多波長反常散射法%耐熱鄰苯二酚2,3雙加氧酶%錶達%純化
갑서안산다파장반상산사법%내열린분이분2,3쌍가양매%표체%순화
甲硒氨酸多波长反常散射法是国际上90年代发展的蛋白质晶体结构测定的新方法,该法得以实施的首要一步是获得硒取代(硫)的高纯蛋白质,通过亚克隆将编码耐热邻苯二酚2,3双加氧酶(简称TCTD)的基因PHEB克隆至表达载体pRSET,得到了高表达质粒pRSET-PHEB,转入Met缺陷的菌株B834DE3.通过诱导表达和分离纯化得到了甲硒氨酸参入的TCTD.经质谱测定发现TCTD的所有7个甲硫氨酸都被甲硒氨酸所替代,这为Se-Met多波长反常散射法研究TCTD的晶体结构打下了基础.
甲硒氨痠多波長反常散射法是國際上90年代髮展的蛋白質晶體結構測定的新方法,該法得以實施的首要一步是穫得硒取代(硫)的高純蛋白質,通過亞剋隆將編碼耐熱鄰苯二酚2,3雙加氧酶(簡稱TCTD)的基因PHEB剋隆至錶達載體pRSET,得到瞭高錶達質粒pRSET-PHEB,轉入Met缺陷的菌株B834DE3.通過誘導錶達和分離純化得到瞭甲硒氨痠參入的TCTD.經質譜測定髮現TCTD的所有7箇甲硫氨痠都被甲硒氨痠所替代,這為Se-Met多波長反常散射法研究TCTD的晶體結構打下瞭基礎.
갑서안산다파장반상산사법시국제상90년대발전적단백질정체결구측정적신방법,해법득이실시적수요일보시획득서취대(류)적고순단백질,통과아극륭장편마내열린분이분2,3쌍가양매(간칭TCTD)적기인PHEB극륭지표체재체pRSET,득도료고표체질립pRSET-PHEB,전입Met결함적균주B834DE3.통과유도표체화분리순화득도료갑서안산삼입적TCTD.경질보측정발현TCTD적소유7개갑류안산도피갑서안산소체대,저위Se-Met다파장반상산사법연구TCTD적정체결구타하료기출.
