遗传学报
遺傳學報
유전학보
ACTA GENETICA SINICA
2002年
8期
659-665
,共7页
王跃群%Brooks Gavin%朱传柄%袁婺洲%李永青%吴秀山
王躍群%Brooks Gavin%硃傳柄%袁婺洲%李永青%吳秀山
왕약군%Brooks Gavin%주전병%원무주%리영청%오수산
T型钙通道%细胞增殖%细胞周期%HEK-293细胞
T型鈣通道%細胞增殖%細胞週期%HEK-293細胞
T형개통도%세포증식%세포주기%HEK-293세포
将人类T型钙通道α1H亚单位基因(CACNA1H) cDNA转染到HEK-293(human embroyonic kidney)细胞系得到稳定过量表达的细胞株,以此为体外模型来研究T型钙通道在细胞增殖中的直接作用.RT-PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α1H亚单位的过量表达.生长曲线结果表明,T型钙通道α1H亚单位基因的过量表达能显著促进HEK-293细胞增殖,将细胞群体倍增时间从对照细胞的22.1±1.1h缩短到稳定转染细胞的14.0±0.4h,细胞群体倍增时间缩短了约8h;流式细胞分析结果表明,在稳定转染细胞处于S期的细胞百分率比对照细胞高,相反地处于G1期的百分率比对照细胞低,以上结果证明了过量表达T型钙通道亚单位α1H基因能促进细胞增殖.Western印迹结果提示,T型钙通道α1H亚单位基因表达产物是通过某种信号途径,提高了与细胞周期有关基因(CDK2、cyclin A和cyclin E)的蛋白质表达水平,从而刺激了细胞周期的进程.此研究结果有助于理解细胞增殖的机制并为开发治疗与细胞增殖异常有关疾病的新药提供了理论依据.
將人類T型鈣通道α1H亞單位基因(CACNA1H) cDNA轉染到HEK-293(human embroyonic kidney)細胞繫得到穩定過量錶達的細胞株,以此為體外模型來研究T型鈣通道在細胞增殖中的直接作用.RT-PCR和標準全細胞膜片鉗記錄分彆從mRNA轉錄水平和T型鈣通道蛋白功能水平驗證瞭α1H亞單位的過量錶達.生長麯線結果錶明,T型鈣通道α1H亞單位基因的過量錶達能顯著促進HEK-293細胞增殖,將細胞群體倍增時間從對照細胞的22.1±1.1h縮短到穩定轉染細胞的14.0±0.4h,細胞群體倍增時間縮短瞭約8h;流式細胞分析結果錶明,在穩定轉染細胞處于S期的細胞百分率比對照細胞高,相反地處于G1期的百分率比對照細胞低,以上結果證明瞭過量錶達T型鈣通道亞單位α1H基因能促進細胞增殖.Western印跡結果提示,T型鈣通道α1H亞單位基因錶達產物是通過某種信號途徑,提高瞭與細胞週期有關基因(CDK2、cyclin A和cyclin E)的蛋白質錶達水平,從而刺激瞭細胞週期的進程.此研究結果有助于理解細胞增殖的機製併為開髮治療與細胞增殖異常有關疾病的新藥提供瞭理論依據.
장인류T형개통도α1H아단위기인(CACNA1H) cDNA전염도HEK-293(human embroyonic kidney)세포계득도은정과량표체적세포주,이차위체외모형래연구T형개통도재세포증식중적직접작용.RT-PCR화표준전세포막편겸기록분별종mRNA전록수평화T형개통도단백공능수평험증료α1H아단위적과량표체.생장곡선결과표명,T형개통도α1H아단위기인적과량표체능현저촉진HEK-293세포증식,장세포군체배증시간종대조세포적22.1±1.1h축단도은정전염세포적14.0±0.4h,세포군체배증시간축단료약8h;류식세포분석결과표명,재은정전염세포처우S기적세포백분솔비대조세포고,상반지처우G1기적백분솔비대조세포저,이상결과증명료과량표체T형개통도아단위α1H기인능촉진세포증식.Western인적결과제시,T형개통도α1H아단위기인표체산물시통과모충신호도경,제고료여세포주기유관기인(CDK2、cyclin A화cyclin E)적단백질표체수평,종이자격료세포주기적진정.차연구결과유조우리해세포증식적궤제병위개발치료여세포증식이상유관질병적신약제공료이론의거.
