微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2002年
3期
281-287
,共7页
肖少波%方六荣%王革非%陈焕春%洪文洲
肖少波%方六榮%王革非%陳煥春%洪文洲
초소파%방륙영%왕혁비%진환춘%홍문주
伪狂犬病病毒%gI%序列分析%体外表达%增殖
偽狂犬病病毒%gI%序列分析%體外錶達%增殖
위광견병병독%gI%서렬분석%체외표체%증식
从伪狂犬病毒(PRV)国内地方分离Ea株基因组DNA片段中克隆了完整的gl基因,序列分析结果表明,gl基因编码区全长1101bp,可编码366个氨基酸残基,二级结构预测具有典型Ⅰ型膜蛋白特征.与GenBank中收录的国外Rice株的同源比较发现,Ea株gl在核苷酸和氨基酸水平上均存在多处突变,尤其是潜在胞浆区中连续两个碱基的缺失导致移码突变,致使gl基因的读码框架后移,从而导致Ea株gl较rice株长16个氨基酸残基.将gl基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1+中的人巨细胞病毒早期启动子下游,构建的真核表达质粒转染PK-15细胞,间接免疫荧光检测证实gl获得正确表达.进一步测定天然缺失gl的PRV弱毒Bartha株在表达gI细胞系和空白载体转染的对照细胞系中的蚀斑形成单位(pfu)和组织细胞培养半数感染量(TCID5o),结果显示:Bartha株在表达gl细胞系中的pfu和TCID5o分别为对照细胞系的164%和200%.说明gl具有促进病毒增殖的功能.
從偽狂犬病毒(PRV)國內地方分離Ea株基因組DNA片段中剋隆瞭完整的gl基因,序列分析結果錶明,gl基因編碼區全長1101bp,可編碼366箇氨基痠殘基,二級結構預測具有典型Ⅰ型膜蛋白特徵.與GenBank中收錄的國外Rice株的同源比較髮現,Ea株gl在覈苷痠和氨基痠水平上均存在多處突變,尤其是潛在胞漿區中連續兩箇堿基的缺失導緻移碼突變,緻使gl基因的讀碼框架後移,從而導緻Ea株gl較rice株長16箇氨基痠殘基.將gl基因剋隆到真覈錶達載體pcDNA3.1+中的人巨細胞病毒早期啟動子下遊,構建的真覈錶達質粒轉染PK-15細胞,間接免疫熒光檢測證實gl穫得正確錶達.進一步測定天然缺失gl的PRV弱毒Bartha株在錶達gI細胞繫和空白載體轉染的對照細胞繫中的蝕斑形成單位(pfu)和組織細胞培養半數感染量(TCID5o),結果顯示:Bartha株在錶達gl細胞繫中的pfu和TCID5o分彆為對照細胞繫的164%和200%.說明gl具有促進病毒增殖的功能.
종위광견병독(PRV)국내지방분리Ea주기인조DNA편단중극륭료완정적gl기인,서렬분석결과표명,gl기인편마구전장1101bp,가편마366개안기산잔기,이급결구예측구유전형Ⅰ형막단백특정.여GenBank중수록적국외Rice주적동원비교발현,Ea주gl재핵감산화안기산수평상균존재다처돌변,우기시잠재포장구중련속량개감기적결실도치이마돌변,치사gl기인적독마광가후이,종이도치Ea주gl교rice주장16개안기산잔기.장gl기인극륭도진핵표체재체pcDNA3.1+중적인거세포병독조기계동자하유,구건적진핵표체질립전염PK-15세포,간접면역형광검측증실gl획득정학표체.진일보측정천연결실gl적PRV약독Bartha주재표체gI세포계화공백재체전염적대조세포계중적식반형성단위(pfu)화조직세포배양반수감염량(TCID5o),결과현시:Bartha주재표체gl세포계중적pfu화TCID5o분별위대조세포계적164%화200%.설명gl구유촉진병독증식적공능.
