中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2003年
1期
1-4
,共4页
祝晓春%姚智慧%贺争鸣%胡经畲%董关木%俞永新
祝曉春%姚智慧%賀爭鳴%鬍經畬%董關木%俞永新
축효춘%요지혜%하쟁명%호경여%동관목%유영신
汉坦病毒%重组核蛋白%免疫印迹试验%间接酶联免疫吸附试验
漢坦病毒%重組覈蛋白%免疫印跡試驗%間接酶聯免疫吸附試驗
한탄병독%중조핵단백%면역인적시험%간접매련면역흡부시험
目的获得汉坦病毒重组核蛋白,并将其应用于血清学诊断.方法采用PCR方法,从带有HTN型Z10株病毒全长核蛋白基因的质粒上扩增读码框的前354bp的核蛋白基因片段.将截短的核蛋白基因片段插入表达载体pGEX-20T,得到重组质粒pGEX20-Z10trNP,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose 4B柱纯化,并进行抗原性及抗原特异性检测.结果 pGEX20-Z10trBP表达产物是相对分子质量约为40000的谷光甘肽转移酶(GST)融合蛋白GST-Z10trNP.经Western blot分析,GST-Z10trNP具有良好的抗原性.用纯化GST-Z10trNP为抗原,用ELISA间接法检测出血热病人血清、出血热疫苗免疫的家兔及小鼠血清,均能很好地区分阴性和阳性血清.结论 GST-Z10trNP表达量高,易于纯化,并且具有良好的抗原性及抗原特异性,是一种安全、廉价的诊断抗原.
目的穫得漢坦病毒重組覈蛋白,併將其應用于血清學診斷.方法採用PCR方法,從帶有HTN型Z10株病毒全長覈蛋白基因的質粒上擴增讀碼框的前354bp的覈蛋白基因片段.將截短的覈蛋白基因片段插入錶達載體pGEX-20T,得到重組質粒pGEX20-Z10trNP,轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導錶達,錶達產物經Glutathione Sepharose 4B柱純化,併進行抗原性及抗原特異性檢測.結果 pGEX20-Z10trBP錶達產物是相對分子質量約為40000的穀光甘肽轉移酶(GST)融閤蛋白GST-Z10trNP.經Western blot分析,GST-Z10trNP具有良好的抗原性.用純化GST-Z10trNP為抗原,用ELISA間接法檢測齣血熱病人血清、齣血熱疫苗免疫的傢兔及小鼠血清,均能很好地區分陰性和暘性血清.結論 GST-Z10trNP錶達量高,易于純化,併且具有良好的抗原性及抗原特異性,是一種安全、廉價的診斷抗原.
목적획득한탄병독중조핵단백,병장기응용우혈청학진단.방법채용PCR방법,종대유HTN형Z10주병독전장핵단백기인적질립상확증독마광적전354bp적핵단백기인편단.장절단적핵단백기인편단삽입표체재체pGEX-20T,득도중조질립pGEX20-Z10trNP,전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도표체,표체산물경Glutathione Sepharose 4B주순화,병진행항원성급항원특이성검측.결과 pGEX20-Z10trBP표체산물시상대분자질량약위40000적곡광감태전이매(GST)융합단백GST-Z10trNP.경Western blot분석,GST-Z10trNP구유량호적항원성.용순화GST-Z10trNP위항원,용ELISA간접법검측출혈열병인혈청、출혈열역묘면역적가토급소서혈청,균능흔호지구분음성화양성혈청.결론 GST-Z10trNP표체량고,역우순화,병차구유량호적항원성급항원특이성,시일충안전、렴개적진단항원.
