上海医学
上海醫學
상해의학
SHANGHAI MEDICAL JOURNAL
2012年
7期
592-596,前插2
,共6页
张燕飞%降建新%王瑛%张夔鸣%庄仲伟%杨成%孙志扬
張燕飛%降建新%王瑛%張夔鳴%莊仲偉%楊成%孫誌颺
장연비%강건신%왕영%장기명%장중위%양성%손지양
颅脑损伤%白血病基因2%神经元凋亡%侧方液压冲击%转基因小鼠
顱腦損傷%白血病基因2%神經元凋亡%側方液壓遲擊%轉基因小鼠
로뇌손상%백혈병기인2%신경원조망%측방액압충격%전기인소서
目的 通过研究B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)高表达转基因小鼠和对照小鼠颅脑打击后神经元凋亡的差异,探寻Bcl-2抗凋亡及减轻颅脑损伤的作用.方法 将构建的Bcl-2质粒转入C57BL/6J×CBA杂交小鼠的受精卵,培育得到携带Bcl-2的小鼠.Bcl-2转基因小鼠9只作为实验鼠,采用随机数字法分为实验1d组、实验7d组和实验14 d组,每组3只.同窝非转基因小鼠9只作为对照鼠,采用随机数字法分为对照1d组、对照7d组和对照14d组,每组3只.采用液压打击法中侧方液压打击的方法,以中等打击力致小鼠中等颅脑外伤.余下3只同窝非转基因小鼠为假手术组,仅打开椎板,暴露硬脊膜,不予打击.分别于术后1、7、14 d处死小鼠,取脑组织切片行苏木精-伊红(H-E)染色,观察神经元变化;采用原位末端标记法(TUNEL)染色计数TUNEL标记的阳性细胞数即凋亡神经元,并计算TUNEL染色切片的积分光密度(IOD)值.结果 经聚合酶链反应及Western印迹法检测证明所培育的转基因小鼠为Bcl-2高表达的小鼠.假手术组小鼠脑细胞未见明显变化.实验鼠和对照鼠的脑组织都有出血,结构被破坏,实验鼠的损伤肿胀及出现核固缩或解离的神经元数量少于对照鼠.假手术组小鼠的脑组织未见明显的凋亡神经元细胞.实验鼠和对照鼠的脑组织标本可见TUNEL染色阳性细胞,随时间的推移逐渐增多,在损伤后7d达到高峰,然后稳定并逐渐减少.实验1d组、实验7d组、实验14 d组小鼠的每个光学显微镜高倍镜视野内的TUNEL阳性神经元数(P值分别为0.042、0.039、0.033)和TUNEL染色切片的IOD值(P值均为0.000)均分别显著少于对照1d组、对照7d组、对照14 d组.结论 Bcl-2蛋白是中枢神经系统内在的重要的抗凋亡因子,高表达Bcl-2能够抑制颅脑损伤后神经元的凋亡,从而减轻大脑的损害.
目的 通過研究B細胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)高錶達轉基因小鼠和對照小鼠顱腦打擊後神經元凋亡的差異,探尋Bcl-2抗凋亡及減輕顱腦損傷的作用.方法 將構建的Bcl-2質粒轉入C57BL/6J×CBA雜交小鼠的受精卵,培育得到攜帶Bcl-2的小鼠.Bcl-2轉基因小鼠9隻作為實驗鼠,採用隨機數字法分為實驗1d組、實驗7d組和實驗14 d組,每組3隻.同窩非轉基因小鼠9隻作為對照鼠,採用隨機數字法分為對照1d組、對照7d組和對照14d組,每組3隻.採用液壓打擊法中側方液壓打擊的方法,以中等打擊力緻小鼠中等顱腦外傷.餘下3隻同窩非轉基因小鼠為假手術組,僅打開椎闆,暴露硬脊膜,不予打擊.分彆于術後1、7、14 d處死小鼠,取腦組織切片行囌木精-伊紅(H-E)染色,觀察神經元變化;採用原位末耑標記法(TUNEL)染色計數TUNEL標記的暘性細胞數即凋亡神經元,併計算TUNEL染色切片的積分光密度(IOD)值.結果 經聚閤酶鏈反應及Western印跡法檢測證明所培育的轉基因小鼠為Bcl-2高錶達的小鼠.假手術組小鼠腦細胞未見明顯變化.實驗鼠和對照鼠的腦組織都有齣血,結構被破壞,實驗鼠的損傷腫脹及齣現覈固縮或解離的神經元數量少于對照鼠.假手術組小鼠的腦組織未見明顯的凋亡神經元細胞.實驗鼠和對照鼠的腦組織標本可見TUNEL染色暘性細胞,隨時間的推移逐漸增多,在損傷後7d達到高峰,然後穩定併逐漸減少.實驗1d組、實驗7d組、實驗14 d組小鼠的每箇光學顯微鏡高倍鏡視野內的TUNEL暘性神經元數(P值分彆為0.042、0.039、0.033)和TUNEL染色切片的IOD值(P值均為0.000)均分彆顯著少于對照1d組、對照7d組、對照14 d組.結論 Bcl-2蛋白是中樞神經繫統內在的重要的抗凋亡因子,高錶達Bcl-2能夠抑製顱腦損傷後神經元的凋亡,從而減輕大腦的損害.
목적 통과연구B세포림파류/백혈병기인2(Bcl-2)고표체전기인소서화대조소서로뇌타격후신경원조망적차이,탐심Bcl-2항조망급감경로뇌손상적작용.방법 장구건적Bcl-2질립전입C57BL/6J×CBA잡교소서적수정란,배육득도휴대Bcl-2적소서.Bcl-2전기인소서9지작위실험서,채용수궤수자법분위실험1d조、실험7d조화실험14 d조,매조3지.동와비전기인소서9지작위대조서,채용수궤수자법분위대조1d조、대조7d조화대조14d조,매조3지.채용액압타격법중측방액압타격적방법,이중등타격력치소서중등로뇌외상.여하3지동와비전기인소서위가수술조,부타개추판,폭로경척막,불여타격.분별우술후1、7、14 d처사소서,취뇌조직절편행소목정-이홍(H-E)염색,관찰신경원변화;채용원위말단표기법(TUNEL)염색계수TUNEL표기적양성세포수즉조망신경원,병계산TUNEL염색절편적적분광밀도(IOD)치.결과 경취합매련반응급Western인적법검측증명소배육적전기인소서위Bcl-2고표체적소서.가수술조소서뇌세포미견명현변화.실험서화대조서적뇌조직도유출혈,결구피파배,실험서적손상종창급출현핵고축혹해리적신경원수량소우대조서.가수술조소서적뇌조직미견명현적조망신경원세포.실험서화대조서적뇌조직표본가견TUNEL염색양성세포,수시간적추이축점증다,재손상후7d체도고봉,연후은정병축점감소.실험1d조、실험7d조、실험14 d조소서적매개광학현미경고배경시야내적TUNEL양성신경원수(P치분별위0.042、0.039、0.033)화TUNEL염색절편적IOD치(P치균위0.000)균분별현저소우대조1d조、대조7d조、대조14 d조.결론 Bcl-2단백시중추신경계통내재적중요적항조망인자,고표체Bcl-2능구억제로뇌손상후신경원적조망,종이감경대뇌적손해.