华南农业大学学报
華南農業大學學報
화남농업대학학보
JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY
2008年
2期
108-111
,共4页
区燕宜%徐成刚%叶贺佳%吴晓薇%廖明
區燕宜%徐成剛%葉賀佳%吳曉薇%廖明
구연의%서성강%협하가%오효미%료명
单核细胞增生性李斯特菌%iap基因%原核表达
單覈細胞增生性李斯特菌%iap基因%原覈錶達
단핵세포증생성리사특균%iap기인%원핵표체
该研究利用自行设计的引物通过PCR方法扩增出单核细胞增生性李斯特菌 Listeria monocytogenes C5305 株的iap基因,在iap基因的5'端和3'端分别引入EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ 2 个酶切位点并将其克隆到pET-28a表达载体上,经PCR鉴定、酶切鉴定和核苷酸序列测定后获得重组质粒 pET-28a-iap,将该重组质粒转化人大肠杆菌BL21 (DE3)pLysS,经1 mmol/LIPTG诱导4～6 h后,通过SDS-PAGE及Western-blotting鉴定,证明该基因得到表达,表达产物相对分子质量约为60 000,以可溶形式存在.
該研究利用自行設計的引物通過PCR方法擴增齣單覈細胞增生性李斯特菌 Listeria monocytogenes C5305 株的iap基因,在iap基因的5'耑和3'耑分彆引入EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ 2 箇酶切位點併將其剋隆到pET-28a錶達載體上,經PCR鑒定、酶切鑒定和覈苷痠序列測定後穫得重組質粒 pET-28a-iap,將該重組質粒轉化人大腸桿菌BL21 (DE3)pLysS,經1 mmol/LIPTG誘導4～6 h後,通過SDS-PAGE及Western-blotting鑒定,證明該基因得到錶達,錶達產物相對分子質量約為60 000,以可溶形式存在.
해연구이용자행설계적인물통과PCR방법확증출단핵세포증생성리사특균 Listeria monocytogenes C5305 주적iap기인,재iap기인적5'단화3'단분별인입EcoR Ⅰ화Xho Ⅰ 2 개매절위점병장기극륭도pET-28a표체재체상,경PCR감정、매절감정화핵감산서렬측정후획득중조질립 pET-28a-iap,장해중조질립전화인대장간균BL21 (DE3)pLysS,경1 mmol/LIPTG유도4～6 h후,통과SDS-PAGE급Western-blotting감정,증명해기인득도표체,표체산물상대분자질량약위60 000,이가용형식존재.
