中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
4期
261-264
,共4页
薛刚%程莹%曹永宽%刘然义%田伏洲%黄文林
薛剛%程瑩%曹永寬%劉然義%田伏洲%黃文林
설강%정형%조영관%류연의%전복주%황문림
次级淋巴组织趋化因子%y-干扰素%融合基因%腺病毒载体
次級淋巴組織趨化因子%y-榦擾素%融閤基因%腺病毒載體
차급림파조직추화인자%y-간우소%융합기인%선병독재체
目的 构建携带人次级淋巴组织趋化因子(6Ckine)和y-干扰素(IFNy)融合基因的重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNy,并在真核细胞中表达.方法 RT-PCR法分别从人淋巴结和外周血单个核细胞中扩增人6Ckine cDNA和IFNT cDNA,分两步先后将6Ckine cDNA和IFN7 cDNA连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,二者之间以Xba I酶切位点相连,应用AdMax腺病毒包装系统在HEK293细胞内同源重组,构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNy,经扩增和纯化后感染真核细胞HepG2,并检测6Ckine/IFNy融合蛋白的表达.结果 所构建的重组腺病毒Ad-6Ckine/IFNy经扩增和纯化后,滴度为1.26×10/10IFU/ml.PCR法鉴定无野生型腺病毒的污染,所携带的6Ckine/IFNy融合基因能在真核细胞中得到表达,表达形式为分泌型.结论 已成功构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNy,并在真核细胞中表达,为进一步研究肿瘤的基因和免疫治疗奠定了基础.
目的 構建攜帶人次級淋巴組織趨化因子(6Ckine)和y-榦擾素(IFNy)融閤基因的重組腺病毒載體Ad-6Ckine/IFNy,併在真覈細胞中錶達.方法 RT-PCR法分彆從人淋巴結和外週血單箇覈細胞中擴增人6Ckine cDNA和IFNT cDNA,分兩步先後將6Ckine cDNA和IFN7 cDNA連接到腺病毒穿梭質粒的多剋隆位點上,二者之間以Xba I酶切位點相連,應用AdMax腺病毒包裝繫統在HEK293細胞內同源重組,構建重組腺病毒載體Ad-6Ckine/IFNy,經擴增和純化後感染真覈細胞HepG2,併檢測6Ckine/IFNy融閤蛋白的錶達.結果 所構建的重組腺病毒Ad-6Ckine/IFNy經擴增和純化後,滴度為1.26×10/10IFU/ml.PCR法鑒定無野生型腺病毒的汙染,所攜帶的6Ckine/IFNy融閤基因能在真覈細胞中得到錶達,錶達形式為分泌型.結論 已成功構建重組腺病毒載體Ad-6Ckine/IFNy,併在真覈細胞中錶達,為進一步研究腫瘤的基因和免疫治療奠定瞭基礎.
목적 구건휴대인차급림파조직추화인자(6Ckine)화y-간우소(IFNy)융합기인적중조선병독재체Ad-6Ckine/IFNy,병재진핵세포중표체.방법 RT-PCR법분별종인림파결화외주혈단개핵세포중확증인6Ckine cDNA화IFNT cDNA,분량보선후장6Ckine cDNA화IFN7 cDNA련접도선병독천사질립적다극륭위점상,이자지간이Xba I매절위점상련,응용AdMax선병독포장계통재HEK293세포내동원중조,구건중조선병독재체Ad-6Ckine/IFNy,경확증화순화후감염진핵세포HepG2,병검측6Ckine/IFNy융합단백적표체.결과 소구건적중조선병독Ad-6Ckine/IFNy경확증화순화후,적도위1.26×10/10IFU/ml.PCR법감정무야생형선병독적오염,소휴대적6Ckine/IFNy융합기인능재진핵세포중득도표체,표체형식위분비형.결론 이성공구건중조선병독재체Ad-6Ckine/IFNy,병재진핵세포중표체,위진일보연구종류적기인화면역치료전정료기출.
