浙江理工大学学报
浙江理工大學學報
절강리공대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG SCI-TECH UNIVERSITY
2010年
5期
784-788
,共5页
武佳%杨耿兵%李伟%娄文加%马清华%徐艳敏%钱程%刘立
武佳%楊耿兵%李偉%婁文加%馬清華%徐豔敏%錢程%劉立
무가%양경병%리위%루문가%마청화%서염민%전정%류립
pcDNA3.0%miR-449a%人宫颈癌细胞
pcDNA3.0%miR-449a%人宮頸癌細胞
pcDNA3.0%miR-449a%인궁경암세포
通过分子克隆技术将pre-miR-449a及其上下游200 bp序列克隆至pcDNA3.0多克隆位点,采用脂质体转染该载体至人宫颈癌Hela细胞中,Real-Time PCR检测载体的表达能力,同时使用荧光淬灭法检测表达产生的miRNA的生物学活性.结果表明:转染实验组载体的Hela细胞miR-449a的表达明显升高,而对照组表达几乎无变化,显示真核表达载体pcDNA3.0可以高效表达miRNA;此外,目的质粒与报告质粒共转染Hela细胞后绿色荧光明显淬灭而对照组荧光未淬灭,证明表达的miRNA具有生物学活性.
通過分子剋隆技術將pre-miR-449a及其上下遊200 bp序列剋隆至pcDNA3.0多剋隆位點,採用脂質體轉染該載體至人宮頸癌Hela細胞中,Real-Time PCR檢測載體的錶達能力,同時使用熒光淬滅法檢測錶達產生的miRNA的生物學活性.結果錶明:轉染實驗組載體的Hela細胞miR-449a的錶達明顯升高,而對照組錶達幾乎無變化,顯示真覈錶達載體pcDNA3.0可以高效錶達miRNA;此外,目的質粒與報告質粒共轉染Hela細胞後綠色熒光明顯淬滅而對照組熒光未淬滅,證明錶達的miRNA具有生物學活性.
통과분자극륭기술장pre-miR-449a급기상하유200 bp서렬극륭지pcDNA3.0다극륭위점,채용지질체전염해재체지인궁경암Hela세포중,Real-Time PCR검측재체적표체능력,동시사용형광쉬멸법검측표체산생적miRNA적생물학활성.결과표명:전염실험조재체적Hela세포miR-449a적표체명현승고,이대조조표체궤호무변화,현시진핵표체재체pcDNA3.0가이고효표체miRNA;차외,목적질립여보고질립공전염Hela세포후록색형광명현쉬멸이대조조형광미쉬멸,증명표체적miRNA구유생물학활성.
