中国药科大学学报
中國藥科大學學報
중국약과대학학보
JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY
2006年
5期
438-442
,共5页
CYP1A1%Bel-7402%稳定转染%3-甲基胆蒽%二甲基苯并蒽
CYP1A1%Bel-7402%穩定轉染%3-甲基膽蒽%二甲基苯併蒽
CYP1A1%Bel-7402%은정전염%3-갑기담은%이갑기분병은
目的:建立稳定表达人细胞色素P4501A1(CYP1A1)的人肝癌细胞系(Bel-7402).方法:通过将人细胞色素P4501A1(CYP1A1)的表达质粒转染到人肝癌细胞系(Bel-7402),经G418抗性筛选得到稳定的克隆并扩大培养成系,Western Blotting检测蛋白的表达.细胞增殖试验鉴定CYP1A1的多环芳烃类底物二甲基苯并蒽(DMBA)对Bel-7402/1A1细胞的增殖抑制作用.双核微核实验对Bel-7402/1A1细胞进行了遗传毒理的短期实验.结果:转染后筛选得到的Bel-7402抗性克隆,Western Blotting检测表明有较高的CYP1A1蛋白表达.细胞暴露于DMBA时,Bel-7402/1A1与Bel-7402细胞相比,细胞增殖明显抑制.双核微核试验表明Bel-7402/1A1细胞的微核率随DMBA浓度增高而显著增加,Bel-7402无明显变化.连续传代后仍有CYP1A1标志酶EROD的较高表达,该酶活性能被CYP1A1抑制剂α-萘黄酮抑制.结论:建立了一个新的稳定表达CYP1A1的1个肝癌细胞系(Bel-7402/CYP1A1),可代谢多环芳烃化合物产生更大的毒性.该细胞系可用来筛选能被CYP1A1代谢的化合物,或能抑制CYP1A1活性的化合物,并可用来研究CYP1A1的催化性质及被CYP1A1代谢的化合物的毒性机理.
目的:建立穩定錶達人細胞色素P4501A1(CYP1A1)的人肝癌細胞繫(Bel-7402).方法:通過將人細胞色素P4501A1(CYP1A1)的錶達質粒轉染到人肝癌細胞繫(Bel-7402),經G418抗性篩選得到穩定的剋隆併擴大培養成繫,Western Blotting檢測蛋白的錶達.細胞增殖試驗鑒定CYP1A1的多環芳烴類底物二甲基苯併蒽(DMBA)對Bel-7402/1A1細胞的增殖抑製作用.雙覈微覈實驗對Bel-7402/1A1細胞進行瞭遺傳毒理的短期實驗.結果:轉染後篩選得到的Bel-7402抗性剋隆,Western Blotting檢測錶明有較高的CYP1A1蛋白錶達.細胞暴露于DMBA時,Bel-7402/1A1與Bel-7402細胞相比,細胞增殖明顯抑製.雙覈微覈試驗錶明Bel-7402/1A1細胞的微覈率隨DMBA濃度增高而顯著增加,Bel-7402無明顯變化.連續傳代後仍有CYP1A1標誌酶EROD的較高錶達,該酶活性能被CYP1A1抑製劑α-萘黃酮抑製.結論:建立瞭一箇新的穩定錶達CYP1A1的1箇肝癌細胞繫(Bel-7402/CYP1A1),可代謝多環芳烴化閤物產生更大的毒性.該細胞繫可用來篩選能被CYP1A1代謝的化閤物,或能抑製CYP1A1活性的化閤物,併可用來研究CYP1A1的催化性質及被CYP1A1代謝的化閤物的毒性機理.
목적:건립은정표체인세포색소P4501A1(CYP1A1)적인간암세포계(Bel-7402).방법:통과장인세포색소P4501A1(CYP1A1)적표체질립전염도인간암세포계(Bel-7402),경G418항성사선득도은정적극륭병확대배양성계,Western Blotting검측단백적표체.세포증식시험감정CYP1A1적다배방경류저물이갑기분병은(DMBA)대Bel-7402/1A1세포적증식억제작용.쌍핵미핵실험대Bel-7402/1A1세포진행료유전독리적단기실험.결과:전염후사선득도적Bel-7402항성극륭,Western Blotting검측표명유교고적CYP1A1단백표체.세포폭로우DMBA시,Bel-7402/1A1여Bel-7402세포상비,세포증식명현억제.쌍핵미핵시험표명Bel-7402/1A1세포적미핵솔수DMBA농도증고이현저증가,Bel-7402무명현변화.련속전대후잉유CYP1A1표지매EROD적교고표체,해매활성능피CYP1A1억제제α-내황동억제.결론:건립료일개신적은정표체CYP1A1적1개간암세포계(Bel-7402/CYP1A1),가대사다배방경화합물산생경대적독성.해세포계가용래사선능피CYP1A1대사적화합물,혹능억제CYP1A1활성적화합물,병가용래연구CYP1A1적최화성질급피CYP1A1대사적화합물적독성궤리.
