江苏医药
江囌醫藥
강소의약
JIANGSU MEDICAL JOURNAL
2006年
11期
1037-1039
,共3页
潘英%朱敏生%傅健%王晓春%李越希
潘英%硃敏生%傅健%王曉春%李越希
반영%주민생%부건%왕효춘%리월희
Utrophin%抗体%乙肝病毒核心抗体
Utrophin%抗體%乙肝病毒覈心抗體
Utrophin%항체%을간병독핵심항체
目的 构建以乙肝病毒HBc为载体的带有utrophin的两个B细胞表位多肽的融合表达质粒pHBc-2UB,表达出融合蛋白并纯化,通过免疫新西兰大白兔获得抗utrophin的抗体.方法 通过DNA starⅡ模拟出utrophin的两个显著优势的B表位.用PCR法合成片段插入HBcAg序列的78位,将该合成片段克隆至pET28a载体中,构建重组表达质粒,表达出融合蛋白HBc-2UB,纯化后免疫新西兰白兔.再将该合成片段克隆至pGEX4-2载体中,构建重组表达质粒,表达出融合蛋白GST-2UB,用于检测两个表位的抗体.结果 测序结果表明重组质粒构建成功,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白表达正确,ELISA检测到高滴度抗体.结论 以HBc呈现utrophin的B表位被成功表达和纯化,获得高滴度的与两个B表位结合的抗体,为utrophin检测和DMD治疗药物研究打下了基础.
目的 構建以乙肝病毒HBc為載體的帶有utrophin的兩箇B細胞錶位多肽的融閤錶達質粒pHBc-2UB,錶達齣融閤蛋白併純化,通過免疫新西蘭大白兔穫得抗utrophin的抗體.方法 通過DNA starⅡ模擬齣utrophin的兩箇顯著優勢的B錶位.用PCR法閤成片段插入HBcAg序列的78位,將該閤成片段剋隆至pET28a載體中,構建重組錶達質粒,錶達齣融閤蛋白HBc-2UB,純化後免疫新西蘭白兔.再將該閤成片段剋隆至pGEX4-2載體中,構建重組錶達質粒,錶達齣融閤蛋白GST-2UB,用于檢測兩箇錶位的抗體.結果 測序結果錶明重組質粒構建成功,SDS-PAGE電泳顯示融閤蛋白錶達正確,ELISA檢測到高滴度抗體.結論 以HBc呈現utrophin的B錶位被成功錶達和純化,穫得高滴度的與兩箇B錶位結閤的抗體,為utrophin檢測和DMD治療藥物研究打下瞭基礎.
목적 구건이을간병독HBc위재체적대유utrophin적량개B세포표위다태적융합표체질립pHBc-2UB,표체출융합단백병순화,통과면역신서란대백토획득항utrophin적항체.방법 통과DNA starⅡ모의출utrophin적량개현저우세적B표위.용PCR법합성편단삽입HBcAg서렬적78위,장해합성편단극륭지pET28a재체중,구건중조표체질립,표체출융합단백HBc-2UB,순화후면역신서란백토.재장해합성편단극륭지pGEX4-2재체중,구건중조표체질립,표체출융합단백GST-2UB,용우검측량개표위적항체.결과 측서결과표명중조질립구건성공,SDS-PAGE전영현시융합단백표체정학,ELISA검측도고적도항체.결론 이HBc정현utrophin적B표위피성공표체화순화,획득고적도적여량개B표위결합적항체,위utrophin검측화DMD치료약물연구타하료기출.
