中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2007年
6期
1204-1207
,共4页
周光纪%徐海伟%杨丽%唐军%李达兵%屈纪富
週光紀%徐海偉%楊麗%唐軍%李達兵%屈紀富
주광기%서해위%양려%당군%리체병%굴기부
基因,pdx-1%胚胎干细胞%真核表达载体
基因,pdx-1%胚胎榦細胞%真覈錶達載體
기인,pdx-1%배태간세포%진핵표체재체
目的:克隆小鼠pdx-1基因,构建其真核表达载体,并在小鼠胚胎干细胞中表达,为糖尿病的细胞移植治疗奠定基础.方法:PCR扩增小鼠胰腺pdx-1基因 cDNA,酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1重组,将pdx-1基因 cDNA片段连接到pEGFP-N1载体的多克隆位点,形成重组载体pEGFP/pdx-1,转化大肠杆菌DH5α菌株,构建成pdx-1基因真核表达载体质粒.扩增DH5α后抽提质粒DNA,Hind Ⅲ和BamHⅠ酶切,电泳,DNA测序鉴定.鉴定正确的质粒DNA用脂质体包裹后转染小鼠胚胎干细胞MESPU13.结果:从小鼠胰腺cDNA扩增出876 bp的DNA片段并成功重组到pEGFP-N1载体中.经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为pdx-1基因,插入方向正确.重组质粒经脂质体转染胚胎干细胞MESPU13,24 h后观察到绿色荧光蛋白报告基因和目的基因的pdx-1表达.结论:小鼠pdx-1基因的克隆和真核表达载体构建获得成功,为进一步研究其功能奠定了基础.
目的:剋隆小鼠pdx-1基因,構建其真覈錶達載體,併在小鼠胚胎榦細胞中錶達,為糖尿病的細胞移植治療奠定基礎.方法:PCR擴增小鼠胰腺pdx-1基因 cDNA,酶切後和攜帶綠色熒光蛋白報告基因的真覈錶達載體pEGFP-N1重組,將pdx-1基因 cDNA片段連接到pEGFP-N1載體的多剋隆位點,形成重組載體pEGFP/pdx-1,轉化大腸桿菌DH5α菌株,構建成pdx-1基因真覈錶達載體質粒.擴增DH5α後抽提質粒DNA,Hind Ⅲ和BamHⅠ酶切,電泳,DNA測序鑒定.鑒定正確的質粒DNA用脂質體包裹後轉染小鼠胚胎榦細胞MESPU13.結果:從小鼠胰腺cDNA擴增齣876 bp的DNA片段併成功重組到pEGFP-N1載體中.經酶切和DNA測序驗證,插入載體的DNA片段為pdx-1基因,插入方嚮正確.重組質粒經脂質體轉染胚胎榦細胞MESPU13,24 h後觀察到綠色熒光蛋白報告基因和目的基因的pdx-1錶達.結論:小鼠pdx-1基因的剋隆和真覈錶達載體構建穫得成功,為進一步研究其功能奠定瞭基礎.
목적:극륭소서pdx-1기인,구건기진핵표체재체,병재소서배태간세포중표체,위당뇨병적세포이식치료전정기출.방법:PCR확증소서이선pdx-1기인 cDNA,매절후화휴대록색형광단백보고기인적진핵표체재체pEGFP-N1중조,장pdx-1기인 cDNA편단련접도pEGFP-N1재체적다극륭위점,형성중조재체pEGFP/pdx-1,전화대장간균DH5α균주,구건성pdx-1기인진핵표체재체질립.확증DH5α후추제질립DNA,Hind Ⅲ화BamHⅠ매절,전영,DNA측서감정.감정정학적질립DNA용지질체포과후전염소서배태간세포MESPU13.결과:종소서이선cDNA확증출876 bp적DNA편단병성공중조도pEGFP-N1재체중.경매절화DNA측서험증,삽입재체적DNA편단위pdx-1기인,삽입방향정학.중조질립경지질체전염배태간세포MESPU13,24 h후관찰도록색형광단백보고기인화목적기인적pdx-1표체.결론:소서pdx-1기인적극륭화진핵표체재체구건획득성공,위진일보연구기공능전정료기출.
