CAJ | 학술논문

目的:研究缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)内活性氧(ROS)水平的变化,ROS对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2蛋白表达的影响以及ROS和ERK1/2在PASMCs增殖和凋亡关系失衡中的作用.方法:原代培养正常大鼠PASMCs,选用第2-3代用于实验.分别在常氧及缺氧条件下用ROS清除剂tiron、ERKl/2抑制剂PD98059进行分组干预.通过NBT还原法和DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS,免疫荧光法检测磷酸化-ERKl/2(P-ERKI/2)蛋白表达,MTT比色法和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的免疫细胞化学法检测细胞增殖,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果:(1)缺氧组细胞内ROS水平明显高于对照组(P<0.01);(2)缺氧组的增殖活性与对照组相比显著增高(P<0.01),而凋亡率显著降低(P<0.01),使用tiron后能明显抑制缺氧诱导的细胞增殖(P<0.05),而凋亡率却明显升高(P<0.01);(3)缺氧组P-ERK1/2蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),使用tiron后缺氧诱导的P-ERKl/2表达被显著抑制(P<0.01);(4)使用PD98059也能明显抑制缺氧诱导的细胞增殖(P<0.05),而凋亡率也明显升高(P<0.01),缺氧下同时使用PD98059和tiron与单用timn相比,对细胞增殖和凋亡的影响均无明显差异(P>0.05).结论:缺氧时PASMCs中生成增多的ROS通过活化下游ERK1/2信号通路,促进PASMCs增殖并抑制凋亡,从而在缺氧性肺动脉重建过程中发挥重要作用.
목적:연구결양상태하대서폐동맥평활기세포(PASMCs)내활성양(ROS)수평적변화,ROS대세포외신호조절격매(ERK)1/2단백표체적영향이급ROS화ERK1/2재PASMCs증식화조망관계실형중적작용.방법:원대배양정상대서PASMCs,선용제2-3대용우실험.분별재상양급결양조건하용ROS청제제tiron、ERKl/2억제제PD98059진행분조간예.통과NBT환원법화DCFH-DA형광탐침검측세포내ROS,면역형광법검측린산화-ERKl/2(P-ERKI/2)단백표체,MTT비색법화증식세포핵항원(PCNA)단백적면역세포화학법검측세포증식,원위말단표기법(TUNEL)검측세포조망.결과:(1)결양조세포내ROS수평명현고우대조조(P<0.01);(2)결양조적증식활성여대조조상비현저증고(P<0.01),이조망솔현저강저(P<0.01),사용tiron후능명현억제결양유도적세포증식(P<0.05),이조망솔각명현승고(P<0.01);(3)결양조P-ERK1/2단백표체현저고우대조조(P<0.01),사용tiron후결양유도적P-ERKl/2표체피현저억제(P<0.01);(4)사용PD98059야능명현억제결양유도적세포증식(P<0.05),이조망솔야명현승고(P<0.01),결양하동시사용PD98059화tiron여단용timn상비,대세포증식화조망적영향균무명현차이(P>0.05).결론:결양시PASMCs중생성증다적ROS통과활화하유ERK1/2신호통로,촉진PASMCs증식병억제조망,종이재결양성폐동맥중건과정중발휘중요작용.