生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2009年
1期
10-13
,共4页
马信%林爱玲%封德顺%王洪刚%田纪春
馬信%林愛玲%封德順%王洪剛%田紀春
마신%림애령%봉덕순%왕홍강%전기춘
小麦%TaCKXI基因%原核表达%His融合蛋白
小麥%TaCKXI基因%原覈錶達%His融閤蛋白
소맥%TaCKXI기인%원핵표체%His융합단백
目的:构建小麦细胞分裂素氧化酶基因TaCKXI原核表达载体并进行表达,以期得到大量的His标签融合蛋白.方法:根据GenBank中的TaCKXI序列以及pET-24a载体中的多克隆位点设计引物,以含有TaCKXl编码基因的批pMD-QRCKXI重组质粒为模板,经PCR扩增得到TaCKXI基因的DNA片段.将所得的片段与pET-24a载体连接,转化DH5α大肠杆菌,筛选阳性克隆,其测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pET-TaCKXI已构建成功.提取per-TaCKXI质粒转化到BL21(DE3)pLysS表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳鉴定,并优化其表达条件.结果:在大肠杆菌中获得TaCKXI基因融合表达,主要以包涵体形式存在;融合蛋白的分子量为58.91kD;IPTG终浓度为0.5、1.0、1.5.2.0mmol/L时,诱导融合蛋白产量相差不大.选用0.5mmol/L诱导15h获得大量的融合蛋白.经用原核表达蛋白纯化试剂盒纯化,得到了单一的融合蛋白.结论:小麦TaCKXI基因在大肠杆菌中获得了高效表达,为今后TaCKXI蛋白多克隆抗体的制备奠定了基础.
目的:構建小麥細胞分裂素氧化酶基因TaCKXI原覈錶達載體併進行錶達,以期得到大量的His標籤融閤蛋白.方法:根據GenBank中的TaCKXI序列以及pET-24a載體中的多剋隆位點設計引物,以含有TaCKXl編碼基因的批pMD-QRCKXI重組質粒為模闆,經PCR擴增得到TaCKXI基因的DNA片段.將所得的片段與pET-24a載體連接,轉化DH5α大腸桿菌,篩選暘性剋隆,其測序結果與原序列一緻,錶明原覈錶達載體pET-TaCKXI已構建成功.提取per-TaCKXI質粒轉化到BL21(DE3)pLysS錶達菌株中,經IPTG誘導後收集菌體進行SDS-PAGE電泳鑒定,併優化其錶達條件.結果:在大腸桿菌中穫得TaCKXI基因融閤錶達,主要以包涵體形式存在;融閤蛋白的分子量為58.91kD;IPTG終濃度為0.5、1.0、1.5.2.0mmol/L時,誘導融閤蛋白產量相差不大.選用0.5mmol/L誘導15h穫得大量的融閤蛋白.經用原覈錶達蛋白純化試劑盒純化,得到瞭單一的融閤蛋白.結論:小麥TaCKXI基因在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達,為今後TaCKXI蛋白多剋隆抗體的製備奠定瞭基礎.
목적:구건소맥세포분렬소양화매기인TaCKXI원핵표체재체병진행표체,이기득도대량적His표첨융합단백.방법:근거GenBank중적TaCKXI서렬이급pET-24a재체중적다극륭위점설계인물,이함유TaCKXl편마기인적비pMD-QRCKXI중조질립위모판,경PCR확증득도TaCKXI기인적DNA편단.장소득적편단여pET-24a재체련접,전화DH5α대장간균,사선양성극륭,기측서결과여원서렬일치,표명원핵표체재체pET-TaCKXI이구건성공.제취per-TaCKXI질립전화도BL21(DE3)pLysS표체균주중,경IPTG유도후수집균체진행SDS-PAGE전영감정,병우화기표체조건.결과:재대장간균중획득TaCKXI기인융합표체,주요이포함체형식존재;융합단백적분자량위58.91kD;IPTG종농도위0.5、1.0、1.5.2.0mmol/L시,유도융합단백산량상차불대.선용0.5mmol/L유도15h획득대량적융합단백.경용원핵표체단백순화시제합순화,득도료단일적융합단백.결론:소맥TaCKXI기인재대장간균중획득료고효표체,위금후TaCKXI단백다극륭항체적제비전정료기출.
