实用肿瘤学杂志
實用腫瘤學雜誌
실용종류학잡지
JOURNAL OF PRACTICAL ONCOLOGY
2010年
1期
1-7,44
,共8页
刘哲%李文良%康春生%宋云朋%韩磊%张安玲
劉哲%李文良%康春生%宋雲朋%韓磊%張安玲
류철%리문량%강춘생%송운붕%한뢰%장안령
携带野生型PTEN的重组腺病毒%PI3K抑制剂%LY294002%PI3K/AKT%胶质瘤
攜帶野生型PTEN的重組腺病毒%PI3K抑製劑%LY294002%PI3K/AKT%膠質瘤
휴대야생형PTEN적중조선병독%PI3K억제제%LY294002%PI3K/AKT%효질류
目的 在体外实验中,利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)和PI3K的小分子抑制剂LY294002联合抑制PI3K/AKT信号通路,观察两者联合对人胶质瘤细胞系U251生长有无正向协同作用及探讨产生这种作用的机制.方法 U251细胞按处理方式不同分为4组:DMSO对照组、空载病毒对照组、LY294002组和联合组(LY294002+Ad-PTEN组).在U251细胞系中导入LY294002并转染Ad-PTEN病毒后,提取总蛋白,用Western blotting检测PTEN表达状态及PI3K、AKT表达情况;用MTT法检测Ad-PTEN和LY294002对U251生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期、Annexin V法检测细胞凋亡,观察导入LY294002和转染Ad-PTEN后U251增殖能力的改变;用划痕实验、Transwell实验观察LY294002及Ad-PTEN对U251迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测PI3K/AKT信号通路下游相关蛋白表达水平变化.结果 Western blotting显示:与DMSO组和空载病毒组相比,LY294002组PI3K、AKT蛋白表达水平明显降低,联合组(LY294002+Ad-PTEN)的PTEN蛋白明显上调,而PI3K、AKT蛋白下降水平比LY294002组更为显著.联合组与LY294002组、空载病毒组、DMSO组相比细胞周期阻滞在G0/G1期;联合组凋亡率比其他三组明显增加;自培养第2天起,联合组细胞增殖速率呈下降趋势.联合组侵袭和迁移细胞的相对数少于LY294002组、空载病毒组和DMSO组.Western blotting结果证明位于PI3K/AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF-κB、FAK蛋白表达水平显著下调.结论 小分子抑制剂LY294002能够有效抑制U251中PI3K、AKT蛋白的表达,联合转染Ad-PTEN后不仅能提高PTEN蛋白的表达水平,对PI3K、AKT的抑制更为显著.在体外实验中,联合Ad-PTEN和LY294002能够有效地通过阻滞细胞周期、减少细胞凋亡来抑制U251的增殖能力,并能够抑制细胞的侵袭和迁移能力,两者联合使用具有正向协同作用.联合Ad-PTEN和LY294002对U251的生长与侵袭的抑制作用与PI3K/AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF-κB、FAK蛋白表达水平下调有关.联合腺病毒转染技术和小分子抑制剂调控PI3K/AKT信号通路是治疗胶质瘤的新途径.
目的 在體外實驗中,利用攜帶野生型PTEN基因的重組腺病毒(Ad-PTEN)和PI3K的小分子抑製劑LY294002聯閤抑製PI3K/AKT信號通路,觀察兩者聯閤對人膠質瘤細胞繫U251生長有無正嚮協同作用及探討產生這種作用的機製.方法 U251細胞按處理方式不同分為4組:DMSO對照組、空載病毒對照組、LY294002組和聯閤組(LY294002+Ad-PTEN組).在U251細胞繫中導入LY294002併轉染Ad-PTEN病毒後,提取總蛋白,用Western blotting檢測PTEN錶達狀態及PI3K、AKT錶達情況;用MTT法檢測Ad-PTEN和LY294002對U251生長抑製率、流式細胞儀檢測細胞週期、Annexin V法檢測細胞凋亡,觀察導入LY294002和轉染Ad-PTEN後U251增殖能力的改變;用劃痕實驗、Transwell實驗觀察LY294002及Ad-PTEN對U251遷移和侵襲能力的影響;Western blotting檢測PI3K/AKT信號通路下遊相關蛋白錶達水平變化.結果 Western blotting顯示:與DMSO組和空載病毒組相比,LY294002組PI3K、AKT蛋白錶達水平明顯降低,聯閤組(LY294002+Ad-PTEN)的PTEN蛋白明顯上調,而PI3K、AKT蛋白下降水平比LY294002組更為顯著.聯閤組與LY294002組、空載病毒組、DMSO組相比細胞週期阻滯在G0/G1期;聯閤組凋亡率比其他三組明顯增加;自培養第2天起,聯閤組細胞增殖速率呈下降趨勢.聯閤組侵襲和遷移細胞的相對數少于LY294002組、空載病毒組和DMSO組.Western blotting結果證明位于PI3K/AKT下遊的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF-κB、FAK蛋白錶達水平顯著下調.結論 小分子抑製劑LY294002能夠有效抑製U251中PI3K、AKT蛋白的錶達,聯閤轉染Ad-PTEN後不僅能提高PTEN蛋白的錶達水平,對PI3K、AKT的抑製更為顯著.在體外實驗中,聯閤Ad-PTEN和LY294002能夠有效地通過阻滯細胞週期、減少細胞凋亡來抑製U251的增殖能力,併能夠抑製細胞的侵襲和遷移能力,兩者聯閤使用具有正嚮協同作用.聯閤Ad-PTEN和LY294002對U251的生長與侵襲的抑製作用與PI3K/AKT下遊的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF-κB、FAK蛋白錶達水平下調有關.聯閤腺病毒轉染技術和小分子抑製劑調控PI3K/AKT信號通路是治療膠質瘤的新途徑.
목적 재체외실험중,이용휴대야생형PTEN기인적중조선병독(Ad-PTEN)화PI3K적소분자억제제LY294002연합억제PI3K/AKT신호통로,관찰량자연합대인효질류세포계U251생장유무정향협동작용급탐토산생저충작용적궤제.방법 U251세포안처리방식불동분위4조:DMSO대조조、공재병독대조조、LY294002조화연합조(LY294002+Ad-PTEN조).재U251세포계중도입LY294002병전염Ad-PTEN병독후,제취총단백,용Western blotting검측PTEN표체상태급PI3K、AKT표체정황;용MTT법검측Ad-PTEN화LY294002대U251생장억제솔、류식세포의검측세포주기、Annexin V법검측세포조망,관찰도입LY294002화전염Ad-PTEN후U251증식능력적개변;용화흔실험、Transwell실험관찰LY294002급Ad-PTEN대U251천이화침습능력적영향;Western blotting검측PI3K/AKT신호통로하유상관단백표체수평변화.결과 Western blotting현시:여DMSO조화공재병독조상비,LY294002조PI3K、AKT단백표체수평명현강저,연합조(LY294002+Ad-PTEN)적PTEN단백명현상조,이PI3K、AKT단백하강수평비LY294002조경위현저.연합조여LY294002조、공재병독조、DMSO조상비세포주기조체재G0/G1기;연합조조망솔비기타삼조명현증가;자배양제2천기,연합조세포증식속솔정하강추세.연합조침습화천이세포적상대수소우LY294002조、공재병독조화DMSO조.Western blotting결과증명위우PI3K/AKT하유적MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF-κB、FAK단백표체수평현저하조.결론 소분자억제제LY294002능구유효억제U251중PI3K、AKT단백적표체,연합전염Ad-PTEN후불부능제고PTEN단백적표체수평,대PI3K、AKT적억제경위현저.재체외실험중,연합Ad-PTEN화LY294002능구유효지통과조체세포주기、감소세포조망래억제U251적증식능력,병능구억제세포적침습화천이능력,량자연합사용구유정향협동작용.연합Ad-PTEN화LY294002대U251적생장여침습적억제작용여PI3K/AKT하유적MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF-κB、FAK단백표체수평하조유관.연합선병독전염기술화소분자억제제조공PI3K/AKT신호통로시치료효질류적신도경.
