CAJ | 학술논문

背景与目的:Survivin是一个抗凋亡、促增殖的双功能基因,且高表达于多种恶性肿瘤和转化组织中,使其成为抗肿瘤药物研究的新靶点.本研究观察经点突变的重组蛋白药物TATm-Survivin(T34/117A)处理乳腺癌细胞B-Cap-37后,对乳腺癌细胞B-Cap-37细胞周期和增殖的影响,检测其对癌细胞促凋亡且抑制增殖的药效并初步探讨其分子机制.方法:重叠PCR法在TATm-Survivin(T34A)基因上引入突变位点Thr117→Ala117,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期及线粒体膜电位变化;Western blot检测Aurora B激酶底物Histone H3的磷酸化水平和Caspase-3激活情况.结果:TATm-Survivin(T34/117A)蛋白对B-Cap-37细胞的增殖有显著的抑制作用;作用24 h后,细胞被阻滞在G0/G1期,G0/G1期细胞由对照组的(54.1±6.1)%显著增加到(62.7±5.1)%(P＜0.05),作用48 h后,细胞被阻滞在G2/M期,G2/M细胞由对照组的(16.6±8.9)%显著增加到(24.0±6.0)%;Aurora B激酶活性通过Histone H3的磷酸化水平间接反映,蛋白药物处理48 h后p-Histone H3的灰度值由对照组的100%降低到89.8%(P＜0.05);48 h时,细胞线粒体膜电位由对照组的(649.9±8.0)%显著降低到(582.9±15.6)%(P＜0.05);细胞凋亡率由对照组的(4.6±0.7)%显著增加到(42.7±0.5)%(P＜0.01),与对照相比,不同浓度的重组蛋白均激活了Caspase-3.结论:重组蛋白TATmSurvivin(T34/117A)对乳腺癌B-Cap-37具有抑制增殖、促凋亡作用,其与降低Aurora B激酶的活性,并激活Caspase-3相关.
배경여목적:Survivin시일개항조망、촉증식적쌍공능기인,차고표체우다충악성종류화전화조직중,사기성위항종류약물연구적신파점.본연구관찰경점돌변적중조단백약물TATm-Survivin(T34/117A)처리유선암세포B-Cap-37후,대유선암세포B-Cap-37세포주기화증식적영향,검측기대암세포촉조망차억제증식적약효병초보탐토기분자궤제.방법:중첩PCR법재TATm-Survivin(T34A)기인상인입돌변위점Thr117→Ala117,MTT법검측세포증식;류식세포술분석세포조망화세포주기급선립체막전위변화;Western blot검측Aurora B격매저물Histone H3적린산화수평화Caspase-3격활정황.결과:TATm-Survivin(T34/117A)단백대B-Cap-37세포적증식유현저적억제작용;작용24 h후,세포피조체재G0/G1기,G0/G1기세포유대조조적(54.1±6.1)%현저증가도(62.7±5.1)%(P＜0.05),작용48 h후,세포피조체재G2/M기,G2/M세포유대조조적(16.6±8.9)%현저증가도(24.0±6.0)%;Aurora B격매활성통과Histone H3적린산화수평간접반영,단백약물처리48 h후p-Histone H3적회도치유대조조적100%강저도89.8%(P＜0.05);48 h시,세포선립체막전위유대조조적(649.9±8.0)%현저강저도(582.9±15.6)%(P＜0.05);세포조망솔유대조조적(4.6±0.7)%현저증가도(42.7±0.5)%(P＜0.01),여대조상비,불동농도적중조단백균격활료Caspase-3.결론:중조단백TATmSurvivin(T34/117A)대유선암B-Cap-37구유억제증식、촉조망작용,기여강저Aurora B격매적활성,병격활Caspase-3상관.