宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2011年
7期
605-608
,共4页
黄学兰%徐广贤%贾伟%王妍柏%董辉%魏军
黃學蘭%徐廣賢%賈偉%王妍柏%董輝%魏軍
황학란%서엄현%가위%왕연백%동휘%위군
microRNA - 203%慢病毒%绿色荧光蛋白
microRNA - 203%慢病毒%綠色熒光蛋白
microRNA - 203%만병독%록색형광단백
目的 构建microRNA - 203(miR -203)过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定.方法 利用化学合成miR -203发夹前体结构RNA(small hairpin RNA,shRNA),并将其克隆入pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定；利用脂质体将鉴定的阳性重组pSicoR - miR - 203表达载体、pCMV - VSV -G和pCMV -dR8.91三个质粒共转染到HEK - 293T细胞,分别在48h和72h收获上清,包装产生慢病毒.将所得病毒悬液梯度稀释后感染293T细胞,检测病毒滴度,并将制备的病毒颗粒尾静脉注射Balb/c小鼠,检测miR- 203在小鼠体内的表达与分布情况.结果 酶切及测序结果 证明成功构建了pSicoR - miR - 203重组质粒,并成功的包装成慢病毒,病毒滴度为5×107 TU·mL-1.重组病毒在Balb/c小鼠肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有表达.结论 成功构建miR -203慢病毒表达载体,获得高效表达miR -203的慢病毒颗粒,为miR - 203靶基因筛选及其功能的研究奠定了基础.
目的 構建microRNA - 203(miR -203)過錶達慢病毒載體,併對其進行病毒包裝、鑒定與滴度測定.方法 利用化學閤成miR -203髮夾前體結構RNA(small hairpin RNA,shRNA),併將其剋隆入pSicoR質粒中,經雙酶切及測序鑒定；利用脂質體將鑒定的暘性重組pSicoR - miR - 203錶達載體、pCMV - VSV -G和pCMV -dR8.91三箇質粒共轉染到HEK - 293T細胞,分彆在48h和72h收穫上清,包裝產生慢病毒.將所得病毒懸液梯度稀釋後感染293T細胞,檢測病毒滴度,併將製備的病毒顆粒尾靜脈註射Balb/c小鼠,檢測miR- 203在小鼠體內的錶達與分佈情況.結果 酶切及測序結果 證明成功構建瞭pSicoR - miR - 203重組質粒,併成功的包裝成慢病毒,病毒滴度為5×107 TU·mL-1.重組病毒在Balb/c小鼠肝髒、脾髒、肺髒、腎髒均有錶達.結論 成功構建miR -203慢病毒錶達載體,穫得高效錶達miR -203的慢病毒顆粒,為miR - 203靶基因篩選及其功能的研究奠定瞭基礎.
목적 구건microRNA - 203(miR -203)과표체만병독재체,병대기진행병독포장、감정여적도측정.방법 이용화학합성miR -203발협전체결구RNA(small hairpin RNA,shRNA),병장기극륭입pSicoR질립중,경쌍매절급측서감정；이용지질체장감정적양성중조pSicoR - miR - 203표체재체、pCMV - VSV -G화pCMV -dR8.91삼개질립공전염도HEK - 293T세포,분별재48h화72h수획상청,포장산생만병독.장소득병독현액제도희석후감염293T세포,검측병독적도,병장제비적병독과립미정맥주사Balb/c소서,검측miR- 203재소서체내적표체여분포정황.결과 매절급측서결과 증명성공구건료pSicoR - miR - 203중조질립,병성공적포장성만병독,병독적도위5×107 TU·mL-1.중조병독재Balb/c소서간장、비장、폐장、신장균유표체.결론 성공구건miR -203만병독표체재체,획득고효표체miR -203적만병독과립,위miR - 203파기인사선급기공능적연구전정료기출.
