成都医学院学报
成都醫學院學報
성도의학원학보
JOURNAL OF CHENGDU MEDICAL COLLEGE
2011年
4期
316-319,323
,共5页
曾凯宏%杨咏涛%余雪梅%王静%崔越
曾凱宏%楊詠濤%餘雪梅%王靜%崔越
증개굉%양영도%여설매%왕정%최월
牛磺酸%高糖%视网膜%谷氨酸兴奋性%机制
牛磺痠%高糖%視網膜%穀氨痠興奮性%機製
우광산%고당%시망막%곡안산흥강성%궤제
目的 观察牛磺酸对高糖诱导的视网膜谷氨酸兴奋性的影响并探讨其作用的机制.方法 体外培养并采用免疫细胞荧光双标鉴定视网膜Müller细胞.实验分10组,分别是:5 mmol/L葡萄糖培养组(正常对照组),5 mmol/L葡萄糖+0.1 mmol/L牛磺酸培养组,5 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L牛磺酸培养组,5 mmol/L葡萄糖+10 mmol/L牛磺酸培养组,25 mmol/L葡萄糖培养组(高葡萄糖组),25 mmol/L葡萄糖+0.1 mmol/L牛磺酸培养组,25 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L牛磺酸培养组,25 mmol/L葡萄糖+10 mmol/L牛磺酸培养组,5 mmol/L葡萄糖+20 mmol/L甘露醇组(甘露醇对照组).RT-PCR检测谷氨酸转运蛋白(GLAST)和谷氨酰胺合成酶(GS)表达,β-液闪技术检测谷氨酸摄取活性,谷氨酰胺合成酶检测试剂盒检测GS活性.结果 25 mmol/L高葡萄糖培养后Müller细胞中GLAST、GS mRNA表达量较正常对照组明显降低(P＜0.05),L-[2,3-3H]-谷氨酸摄取活性由正常对照组的(726±12) cpm/(min·mg protein)降为(352±10) cpm/(min·mg protein),GS活性由(41.1±2.3)μmol/L γ-谷氨酰羟肟酸(GHA)/(h·mg protein)降为(20.3±2.1)μmol/LGHA/(h·mg protein) (P＜0.05).加入1、10 mmol/L牛磺酸干预可明显上调高葡萄糖组Müller细胞中GLAST、GSmRNA表达量,增加L-[2,3-3H]-谷氨酸摄取活性和GS活性(P＜0.05).加入0.1 mmol/L牛磺酸干预可上调高葡萄糖组Müller细胞中GLAST、GS mRNA表达量,增加L-[2,3-3 H]-谷氨酸摄取活性和GS活性,与高葡萄糖组相比差异无统计学意义(P＞0.05).甘露醇对照组Müller细胞中GLAST、GS mRNA表达量、L-[2,3-3 H]谷氨酸摄取活性和GS活性与正常对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 牛磺酸能降低高糖引起的视网膜谷氨酸兴奋性,其作用机制可能通过上调Müller细胞谷氨酸转运和降解能力,从而维持细胞外空间正常的谷氨酸浓度.
目的 觀察牛磺痠對高糖誘導的視網膜穀氨痠興奮性的影響併探討其作用的機製.方法 體外培養併採用免疫細胞熒光雙標鑒定視網膜Müller細胞.實驗分10組,分彆是:5 mmol/L葡萄糖培養組(正常對照組),5 mmol/L葡萄糖+0.1 mmol/L牛磺痠培養組,5 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L牛磺痠培養組,5 mmol/L葡萄糖+10 mmol/L牛磺痠培養組,25 mmol/L葡萄糖培養組(高葡萄糖組),25 mmol/L葡萄糖+0.1 mmol/L牛磺痠培養組,25 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L牛磺痠培養組,25 mmol/L葡萄糖+10 mmol/L牛磺痠培養組,5 mmol/L葡萄糖+20 mmol/L甘露醇組(甘露醇對照組).RT-PCR檢測穀氨痠轉運蛋白(GLAST)和穀氨酰胺閤成酶(GS)錶達,β-液閃技術檢測穀氨痠攝取活性,穀氨酰胺閤成酶檢測試劑盒檢測GS活性.結果 25 mmol/L高葡萄糖培養後Müller細胞中GLAST、GS mRNA錶達量較正常對照組明顯降低(P＜0.05),L-[2,3-3H]-穀氨痠攝取活性由正常對照組的(726±12) cpm/(min·mg protein)降為(352±10) cpm/(min·mg protein),GS活性由(41.1±2.3)μmol/L γ-穀氨酰羥肟痠(GHA)/(h·mg protein)降為(20.3±2.1)μmol/LGHA/(h·mg protein) (P＜0.05).加入1、10 mmol/L牛磺痠榦預可明顯上調高葡萄糖組Müller細胞中GLAST、GSmRNA錶達量,增加L-[2,3-3H]-穀氨痠攝取活性和GS活性(P＜0.05).加入0.1 mmol/L牛磺痠榦預可上調高葡萄糖組Müller細胞中GLAST、GS mRNA錶達量,增加L-[2,3-3 H]-穀氨痠攝取活性和GS活性,與高葡萄糖組相比差異無統計學意義(P＞0.05).甘露醇對照組Müller細胞中GLAST、GS mRNA錶達量、L-[2,3-3 H]穀氨痠攝取活性和GS活性與正常對照組相比差異無統計學意義(P＞0.05).結論 牛磺痠能降低高糖引起的視網膜穀氨痠興奮性,其作用機製可能通過上調Müller細胞穀氨痠轉運和降解能力,從而維持細胞外空間正常的穀氨痠濃度.
목적 관찰우광산대고당유도적시망막곡안산흥강성적영향병탐토기작용적궤제.방법 체외배양병채용면역세포형광쌍표감정시망막Müller세포.실험분10조,분별시:5 mmol/L포도당배양조(정상대조조),5 mmol/L포도당+0.1 mmol/L우광산배양조,5 mmol/L포도당+1 mmol/L우광산배양조,5 mmol/L포도당+10 mmol/L우광산배양조,25 mmol/L포도당배양조(고포도당조),25 mmol/L포도당+0.1 mmol/L우광산배양조,25 mmol/L포도당+1 mmol/L우광산배양조,25 mmol/L포도당+10 mmol/L우광산배양조,5 mmol/L포도당+20 mmol/L감로순조(감로순대조조).RT-PCR검측곡안산전운단백(GLAST)화곡안선알합성매(GS)표체,β-액섬기술검측곡안산섭취활성,곡안선알합성매검측시제합검측GS활성.결과 25 mmol/L고포도당배양후Müller세포중GLAST、GS mRNA표체량교정상대조조명현강저(P＜0.05),L-[2,3-3H]-곡안산섭취활성유정상대조조적(726±12) cpm/(min·mg protein)강위(352±10) cpm/(min·mg protein),GS활성유(41.1±2.3)μmol/L γ-곡안선간우산(GHA)/(h·mg protein)강위(20.3±2.1)μmol/LGHA/(h·mg protein) (P＜0.05).가입1、10 mmol/L우광산간예가명현상조고포도당조Müller세포중GLAST、GSmRNA표체량,증가L-[2,3-3H]-곡안산섭취활성화GS활성(P＜0.05).가입0.1 mmol/L우광산간예가상조고포도당조Müller세포중GLAST、GS mRNA표체량,증가L-[2,3-3 H]-곡안산섭취활성화GS활성,여고포도당조상비차이무통계학의의(P＞0.05).감로순대조조Müller세포중GLAST、GS mRNA표체량、L-[2,3-3 H]곡안산섭취활성화GS활성여정상대조조상비차이무통계학의의(P＞0.05).결론 우광산능강저고당인기적시망막곡안산흥강성,기작용궤제가능통과상조Müller세포곡안산전운화강해능력,종이유지세포외공간정상적곡안산농도.
