浙江医学
浙江醫學
절강의학
ZHEJIANG MEDICAL JOURNAL
2012年
2期
87-90
,共4页
核心结合因子α1%慢病毒载体%转染%感染
覈心結閤因子α1%慢病毒載體%轉染%感染
핵심결합인자α1%만병독재체%전염%감염
目的 构建含人核心结合因子α1(CBFα1)基因的过表达慢病毒载体,并观察在重组慢病毒感染的人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)中CBFα1基因的表达情况.方法 采用PCR 技术体外扩增人CBFα1,将扩增产物与慢病毒载体pGC-FU连接,构建重组质粒pGC-FU-hCBFα1,并进行酶切及测序鉴定.利用脂质体转染法将pGC-FU-hCBFα1、pHelper1.0和pHelper2.0的3种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒.将PDLFs分为未感染组(未感染任何病毒)、阴性对照病毒感染组(加阴性对照病毒感染)、CBFα1重组慢病毒感染组(加CBFα1重组慢病毒感染),应用免疫细胞化学方法检测目的 基因CBFα1在PDLFs中的表达.结果 重组质粒经测序证实,插入片段与人CBFα1基因序列完全一致.包装慢病毒后检测病毒滴度为2.00×109 TU/ml.免疫细胞化学检测证实了CBFα1在PDLFs中的有效表达.结论 成功构建了携带hCBFα1基因的重组慢病毒,并能有效感染PDLFs,为进一步研究其在牙周组织再生中的生物学功能奠定了基础.
目的 構建含人覈心結閤因子α1(CBFα1)基因的過錶達慢病毒載體,併觀察在重組慢病毒感染的人牙週膜成纖維細胞(PDLFs)中CBFα1基因的錶達情況.方法 採用PCR 技術體外擴增人CBFα1,將擴增產物與慢病毒載體pGC-FU連接,構建重組質粒pGC-FU-hCBFα1,併進行酶切及測序鑒定.利用脂質體轉染法將pGC-FU-hCBFα1、pHelper1.0和pHelper2.0的3種質粒共轉染293T細胞,包裝產生慢病毒.將PDLFs分為未感染組(未感染任何病毒)、陰性對照病毒感染組(加陰性對照病毒感染)、CBFα1重組慢病毒感染組(加CBFα1重組慢病毒感染),應用免疫細胞化學方法檢測目的 基因CBFα1在PDLFs中的錶達.結果 重組質粒經測序證實,插入片段與人CBFα1基因序列完全一緻.包裝慢病毒後檢測病毒滴度為2.00×109 TU/ml.免疫細胞化學檢測證實瞭CBFα1在PDLFs中的有效錶達.結論 成功構建瞭攜帶hCBFα1基因的重組慢病毒,併能有效感染PDLFs,為進一步研究其在牙週組織再生中的生物學功能奠定瞭基礎.
목적 구건함인핵심결합인자α1(CBFα1)기인적과표체만병독재체,병관찰재중조만병독감염적인아주막성섬유세포(PDLFs)중CBFα1기인적표체정황.방법 채용PCR 기술체외확증인CBFα1,장확증산물여만병독재체pGC-FU련접,구건중조질립pGC-FU-hCBFα1,병진행매절급측서감정.이용지질체전염법장pGC-FU-hCBFα1、pHelper1.0화pHelper2.0적3충질립공전염293T세포,포장산생만병독.장PDLFs분위미감염조(미감염임하병독)、음성대조병독감염조(가음성대조병독감염)、CBFα1중조만병독감염조(가CBFα1중조만병독감염),응용면역세포화학방법검측목적 기인CBFα1재PDLFs중적표체.결과 중조질립경측서증실,삽입편단여인CBFα1기인서렬완전일치.포장만병독후검측병독적도위2.00×109 TU/ml.면역세포화학검측증실료CBFα1재PDLFs중적유효표체.결론 성공구건료휴대hCBFα1기인적중조만병독,병능유효감염PDLFs,위진일보연구기재아주조직재생중적생물학공능전정료기출.
