肝胆胰外科杂志
肝膽胰外科雜誌
간담이외과잡지
JOURNAL OF HEPATOPANCREATOBILIARY SURGERY
2012年
4期
308-313
,共6页
汪军%金凯舟%王娟%陈正军%胡志前
汪軍%金凱舟%王娟%陳正軍%鬍誌前
왕군%금개주%왕연%진정군%호지전
改良Trizol法%基因组DNA%总RNA%总蛋白%提取
改良Trizol法%基因組DNA%總RNA%總蛋白%提取
개량Trizol법%기인조DNA%총RNA%총단백%제취
目的 改进传统Trizol法,以至能从微量组织样品中提取高质量RNA并同时提取基因组DNA和总蛋白.方法 用改良后的Trizol法提取小鼠肝脏组织总RNA、基因组DNA以及总蛋白,并与传统Trizol法提取总RNA、商业化试剂盒提取基因组DNA和RIPA裂解Buffer提取总蛋白的方法进行比较.结果 改良Trizol法提取小鼠肝组织RNA的得率为3.64μg/mg,传统Trizol法为1.95μg/mg,平均D260/280比值为2.1和2.01;改良Trizol法能够得到比传统Trizol法更完整的RNA,琼脂糖电泳图谱中28S/18S的比值更接近2∶1.改良Trizol法与商业试剂盒相比,提取所得的基因组DNA尽管在得率上有较明显差距,分别为0.49μg/mg和1.78μg/mg,但仍保持较好的纯度.改良Trizol法提取所得蛋白的平均得率为RIPA Buffer裂解法的50％～60％,经过SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色法验证,并无明显蛋白丢失.结论 改良Trizol法可以同时提取组织的总DNA、RNA与总蛋白,相比传统Trizol法提取总RNA更高效、质量更优;相比商业化试剂盒提取基因组DNA更快捷、更经济;相比RIPA Buffer裂解法提取总蛋白在小分子蛋白的保留中更好.
目的 改進傳統Trizol法,以至能從微量組織樣品中提取高質量RNA併同時提取基因組DNA和總蛋白.方法 用改良後的Trizol法提取小鼠肝髒組織總RNA、基因組DNA以及總蛋白,併與傳統Trizol法提取總RNA、商業化試劑盒提取基因組DNA和RIPA裂解Buffer提取總蛋白的方法進行比較.結果 改良Trizol法提取小鼠肝組織RNA的得率為3.64μg/mg,傳統Trizol法為1.95μg/mg,平均D260/280比值為2.1和2.01;改良Trizol法能夠得到比傳統Trizol法更完整的RNA,瓊脂糖電泳圖譜中28S/18S的比值更接近2∶1.改良Trizol法與商業試劑盒相比,提取所得的基因組DNA儘管在得率上有較明顯差距,分彆為0.49μg/mg和1.78μg/mg,但仍保持較好的純度.改良Trizol法提取所得蛋白的平均得率為RIPA Buffer裂解法的50％～60％,經過SDS-PAGE電泳和攷馬斯亮藍染色法驗證,併無明顯蛋白丟失.結論 改良Trizol法可以同時提取組織的總DNA、RNA與總蛋白,相比傳統Trizol法提取總RNA更高效、質量更優;相比商業化試劑盒提取基因組DNA更快捷、更經濟;相比RIPA Buffer裂解法提取總蛋白在小分子蛋白的保留中更好.
목적 개진전통Trizol법,이지능종미량조직양품중제취고질량RNA병동시제취기인조DNA화총단백.방법 용개량후적Trizol법제취소서간장조직총RNA、기인조DNA이급총단백,병여전통Trizol법제취총RNA、상업화시제합제취기인조DNA화RIPA렬해Buffer제취총단백적방법진행비교.결과 개량Trizol법제취소서간조직RNA적득솔위3.64μg/mg,전통Trizol법위1.95μg/mg,평균D260/280비치위2.1화2.01;개량Trizol법능구득도비전통Trizol법경완정적RNA,경지당전영도보중28S/18S적비치경접근2∶1.개량Trizol법여상업시제합상비,제취소득적기인조DNA진관재득솔상유교명현차거,분별위0.49μg/mg화1.78μg/mg,단잉보지교호적순도.개량Trizol법제취소득단백적평균득솔위RIPA Buffer렬해법적50％～60％,경과SDS-PAGE전영화고마사량람염색법험증,병무명현단백주실.결론 개량Trizol법가이동시제취조직적총DNA、RNA여총단백,상비전통Trizol법제취총RNA경고효、질량경우;상비상업화시제합제취기인조DNA경쾌첩、경경제;상비RIPA Buffer렬해법제취총단백재소분자단백적보류중경호.
