医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2007年
1期
15-19
,共5页
解庭波%俞娟%左泽华%赵旻%伍欣星
解庭波%俞娟%左澤華%趙旻%伍訢星
해정파%유연%좌택화%조민%오흔성
宫颈癌%BLCAP基因%原核表达%条件优化
宮頸癌%BLCAP基因%原覈錶達%條件優化
궁경암%BLCAP기인%원핵표체%조건우화
目的 利用大肠埃希菌表达系统表达宫颈癌相关BLCAP基因,并优化表达条件.方法 利用PCR技术从逆转录病毒重组载体pL(BLCAP)SN中扩增宫颈癌相关BLCAP基因,将其插入到原核表达载体pET-32(a)中,从而构建原核表达重组质粒pET-32(a)-BLCAP,随后将阳性重组质粒转化到表达宿主菌中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,所表达的带有His标签目的融合蛋白经Ni2+亲和层析纯化回收,并采用SDS-PAGE和Western印迹对目的蛋白进行分析和鉴定.结果 构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,含有重组质粒的表达宿主菌经过IPTG诱导表达了分子量约为28 ku的融合蛋白,并经优化确定了最佳的诱导表达条件.结论 成功构建了pET-32(a)-BLCAP原核表达质粒,表达并经纯化得到了BLCAP目的蛋白,为研究该蛋白的性质及其制备针对该蛋白的抗体奠定了基础.
目的 利用大腸埃希菌錶達繫統錶達宮頸癌相關BLCAP基因,併優化錶達條件.方法 利用PCR技術從逆轉錄病毒重組載體pL(BLCAP)SN中擴增宮頸癌相關BLCAP基因,將其插入到原覈錶達載體pET-32(a)中,從而構建原覈錶達重組質粒pET-32(a)-BLCAP,隨後將暘性重組質粒轉化到錶達宿主菌中,通過IPTG誘導錶達併優化錶達條件,所錶達的帶有His標籤目的融閤蛋白經Ni2+親和層析純化迴收,併採用SDS-PAGE和Western印跡對目的蛋白進行分析和鑒定.結果 構建的重組錶達質粒經PCR、酶切和DNA測序鑒定與預期的結果一緻,含有重組質粒的錶達宿主菌經過IPTG誘導錶達瞭分子量約為28 ku的融閤蛋白,併經優化確定瞭最佳的誘導錶達條件.結論 成功構建瞭pET-32(a)-BLCAP原覈錶達質粒,錶達併經純化得到瞭BLCAP目的蛋白,為研究該蛋白的性質及其製備針對該蛋白的抗體奠定瞭基礎.
목적 이용대장애희균표체계통표체궁경암상관BLCAP기인,병우화표체조건.방법 이용PCR기술종역전록병독중조재체pL(BLCAP)SN중확증궁경암상관BLCAP기인,장기삽입도원핵표체재체pET-32(a)중,종이구건원핵표체중조질립pET-32(a)-BLCAP,수후장양성중조질립전화도표체숙주균중,통과IPTG유도표체병우화표체조건,소표체적대유His표첨목적융합단백경Ni2+친화층석순화회수,병채용SDS-PAGE화Western인적대목적단백진행분석화감정.결과 구건적중조표체질립경PCR、매절화DNA측서감정여예기적결과일치,함유중조질립적표체숙주균경과IPTG유도표체료분자량약위28 ku적융합단백,병경우화학정료최가적유도표체조건.결론 성공구건료pET-32(a)-BLCAP원핵표체질립,표체병경순화득도료BLCAP목적단백,위연구해단백적성질급기제비침대해단백적항체전정료기출.
