农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2007年
6期
1029-1033
,共5页
王海青%孟欣%洪玉枝%刘子铎
王海青%孟訢%洪玉枝%劉子鐸
왕해청%맹흔%홍옥지%류자탁
费氏弧菌%β-内切葡聚糖酶%同源分析%酶学分析
費氏弧菌%β-內切葡聚糖酶%同源分析%酶學分析
비씨호균%β-내절포취당매%동원분석%매학분석
以费氏弧菌(Vibrio fischeri)EM17基因组DNA为模板,通过PCR方法克隆了该菌的β-内切葡聚糖酶基因(Gen-Bank登录号:EF533943).将其插入到表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)诱导表达.测序结果经DNAMAN软件分析,该基因与费氏弧菌ES114基因组预测的β-内切葡聚糖酶基因同源性达到97.1%,但与其它β-内切葡聚糖酶基因同源性较低.酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为9.0.同时研究了6种金属离子对该酶活性的影响,结果显示该酶活性依赖金属离子的存在:Mg2+和Ca2+对酶有激活作用;Mn2+和Pb2+则严重抑制该酶的活性.
以費氏弧菌(Vibrio fischeri)EM17基因組DNA為模闆,通過PCR方法剋隆瞭該菌的β-內切葡聚糖酶基因(Gen-Bank登錄號:EF533943).將其插入到錶達載體pGEX-6p-1中,轉化大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3)誘導錶達.測序結果經DNAMAN軟件分析,該基因與費氏弧菌ES114基因組預測的β-內切葡聚糖酶基因同源性達到97.1%,但與其它β-內切葡聚糖酶基因同源性較低.酶學性質研究錶明,該酶的最適反應溫度為60℃,最適反應pH為9.0.同時研究瞭6種金屬離子對該酶活性的影響,結果顯示該酶活性依賴金屬離子的存在:Mg2+和Ca2+對酶有激活作用;Mn2+和Pb2+則嚴重抑製該酶的活性.
이비씨호균(Vibrio fischeri)EM17기인조DNA위모판,통과PCR방법극륭료해균적β-내절포취당매기인(Gen-Bank등록호:EF533943).장기삽입도표체재체pGEX-6p-1중,전화대장간균(Escherichia coli)BL21(DE3)유도표체.측서결과경DNAMAN연건분석,해기인여비씨호균ES114기인조예측적β-내절포취당매기인동원성체도97.1%,단여기타β-내절포취당매기인동원성교저.매학성질연구표명,해매적최괄반응온도위60℃,최괄반응pH위9.0.동시연구료6충금속리자대해매활성적영향,결과현시해매활성의뢰금속리자적존재:Mg2+화Ca2+대매유격활작용;Mn2+화Pb2+칙엄중억제해매적활성.
