南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2009年
3期
408-411
,共4页
刘承武%胡水旺%陈登宇%冯国开%邓鹏%姜勇
劉承武%鬍水旺%陳登宇%馮國開%鄧鵬%薑勇
류승무%호수왕%진등우%풍국개%산붕%강용
α1-抗胰蛋白酶%血凝素%细胞内定位%载体构建
α1-抗胰蛋白酶%血凝素%細胞內定位%載體構建
α1-항이단백매%혈응소%세포내정위%재체구건
目的 构建鼠α1-抗胰蛋白酶(AAT)的真核表达载体,观察其在NIH 3T3细胞中的表达及定位情况.方法 提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到AAT编码序列.然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后转染NIH 3T3细胞,在荧光显微镜下观察结果.结果 重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明构建正确.转染实验发现,该质粒能够在NIH 3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中.结论 成功构建带HA标签的AAT真核表达载体.该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为下一步深入研究AAT在细胞内的相关生物学功能提供了一个重要工具.
目的 構建鼠α1-抗胰蛋白酶(AAT)的真覈錶達載體,觀察其在NIH 3T3細胞中的錶達及定位情況.方法 提取BALB/c小鼠肝髒組織的總RNA,通過RT-PCR擴增得到AAT編碼序列.然後將該編碼序列剋隆到帶有血凝素(HA)標記的載體pcDNA3-HA上,隨後轉染NIH 3T3細胞,在熒光顯微鏡下觀察結果.結果 重組質粒經PCR、酶切和測序鑒定證明構建正確.轉染實驗髮現,該質粒能夠在NIH 3T3細胞中錶達,錶達產物主要定位在細胞質中.結論 成功構建帶HA標籤的AAT真覈錶達載體.該載體能在哺乳動物細胞中有效錶達併正確定位,為下一步深入研究AAT在細胞內的相關生物學功能提供瞭一箇重要工具.
목적 구건서α1-항이단백매(AAT)적진핵표체재체,관찰기재NIH 3T3세포중적표체급정위정황.방법 제취BALB/c소서간장조직적총RNA,통과RT-PCR확증득도AAT편마서렬.연후장해편마서렬극륭도대유혈응소(HA)표기적재체pcDNA3-HA상,수후전염NIH 3T3세포,재형광현미경하관찰결과.결과 중조질립경PCR、매절화측서감정증명구건정학.전염실험발현,해질립능구재NIH 3T3세포중표체,표체산물주요정위재세포질중.결론 성공구건대HA표첨적AAT진핵표체재체.해재체능재포유동물세포중유효표체병정학정위,위하일보심입연구AAT재세포내적상관생물학공능제공료일개중요공구.
