中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2009年
2期
135-139
,共5页
施开创%陈进喜%屈素洁%许瑞胜%熊毅%刘棋%陈汉忠%李刚
施開創%陳進喜%屈素潔%許瑞勝%熊毅%劉棋%陳漢忠%李剛
시개창%진진희%굴소길%허서성%웅의%류기%진한충%리강
脑心肌炎病毒%猪%荧光定量PCR%SYBR Green I
腦心肌炎病毒%豬%熒光定量PCR%SYBR Green I
뇌심기염병독%저%형광정량PCR%SYBR Green I
针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因序列设计并合成了l对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR Green I real-time PCR方法.检测结果显示,该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991;对初始模板的检出下限为1×101copies/μL,比常规PCR方法高100倍;与其他猪源病毒,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)均不发生交叉反应;组内与组间的变异系数均小于3%.应用建立的方法检测了17份临床可疑病例的心、脑组织样本,结果1份为阳性.表明,建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的病原检测及定量分析.
針對豬腦心肌炎病毒(EMCV)VP1基因序列設計併閤成瞭l對引物,以構建的含有該引物擴增序列的重組質粒作為暘性標準品,建立瞭檢測EMCV覈痠的SYBR Green I real-time PCR方法.檢測結果顯示,該方法線性關繫好,標準麯線的相關繫數達到0.991;對初始模闆的檢齣下限為1×101copies/μL,比常規PCR方法高100倍;與其他豬源病毒,如口蹄疫病毒(FMDV)、豬生殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)、豬瘟病毒(CSFV)、偽狂犬病病毒(PRV)均不髮生交扠反應;組內與組間的變異繫數均小于3%.應用建立的方法檢測瞭17份臨床可疑病例的心、腦組織樣本,結果1份為暘性.錶明,建立的real-time PCR檢測方法靈敏度高、特異性彊、重複性好,可以用于EMCV的病原檢測及定量分析.
침대저뇌심기염병독(EMCV)VP1기인서렬설계병합성료l대인물,이구건적함유해인물확증서렬적중조질립작위양성표준품,건립료검측EMCV핵산적SYBR Green I real-time PCR방법.검측결과현시,해방법선성관계호,표준곡선적상관계수체도0.991;대초시모판적검출하한위1×101copies/μL,비상규PCR방법고100배;여기타저원병독,여구제역병독(FMDV)、저생식여호흡종합정병독(PRRSV)、저온병독(CSFV)、위광견병병독(PRV)균불발생교차반응;조내여조간적변이계수균소우3%.응용건립적방법검측료17빈림상가의병례적심、뇌조직양본,결과1빈위양성.표명,건립적real-time PCR검측방법령민도고、특이성강、중복성호,가이용우EMCV적병원검측급정량분석.
