CAJ | 학술논문

目的培养毛囊神经干细胞,研究其对受损视神经大胶质细胞去分化的影响. 方法取约90g雄性SD大鼠触须垫毛囊隆突区贴块,无血清培养或经15%胎牛血清诱导培养毛囊隆突区细胞,用免疫荧光细胞化学和PCR鉴定;以含增强型绿色荧光蛋白的腺相关病毒(rAAV2-EGFP)稳定转染该细胞.成年雄性SD大鼠54只,分为正常对照组、损伤组、移植组,移植组为视神经损伤后移植上述毛囊神经干细胞.转染细胞移植组术后7d、14d、30d,取视神经荧光显微镜下观察;损伤组和未转染细胞移植组术后7d取术侧视神经行Affymetrix基因芯片及实时荧光定量PCR检测,术后7d、14d取术侧视神经行HE、免疫组织化学检测. 结果成功培养出神经前体细胞标记分子阳性的毛囊神经干细胞,诱导后该细胞可表达成熟神经细胞标记分子.毛囊神经干细胞移植到受损视神经30 d后,仍能存活和迁移.与损伤组相比,移植组差异表达基因有240条,其中一些与去分化相关,如干细胞、凋亡、增殖、信号转导、转录、分化发育、细胞黏附等相关基因,实时荧光定量PCR与基因芯片结果基本相符.移植组视神经远侧段细胞数较损伤组明显增多,巢蛋白、髓鞘碱性蛋白(MBP)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达增加,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达减少,且视神经近侧段神经丝(NF)表达增加. 结论毛囊神经干细胞通过调节受损视神经中的一些基因表达,促进了其大胶质细胞去分化并向有利于神经再生方向变化.
목적 배양모낭신경간세포,연구기대수손시신경대효질세포거분화적영향. 방법 취약90g웅성SD대서촉수점모낭륭돌구첩괴,무혈청배양혹경15%태우혈청유도배양모낭륭돌구세포,용면역형광세포화학화PCR감정;이함증강형록색형광단백적선상관병독(rAAV2-EGFP)은정전염해세포.성년웅성SD대서54지,분위정상대조조、손상조、이식조,이식조위시신경손상후이식상술모낭신경간세포.전염세포이식조술후7d、14d、30d,취시신경형광현미경하관찰;손상조화미전염세포이식조술후7d취술측시신경행Affymetrix기인심편급실시형광정량PCR검측,술후7d、14d취술측시신경행HE、면역조직화학검측. 결과 성공배양출신경전체세포표기분자양성적모낭신경간세포,유도후해세포가표체성숙신경세포표기분자.모낭신경간세포이식도수손시신경30 d후,잉능존활화천이.여손상조상비,이식조차이표체기인유240조,기중일사여거분화상관,여간세포、조망、증식、신호전도、전록、분화발육、세포점부등상관기인,실시형광정량PCR여기인심편결과기본상부.이식조시신경원측단세포수교손상조명현증다,소단백、수초감성단백(MBP)、세포외신호조절격매1/2(ERK1/2)표체증가,효질섬유산성단백(GFAP)표체감소,차시신경근측단신경사(NF)표체증가. 결론 모낭신경간세포통과조절수손시신경중적일사기인표체,촉진료기대효질세포거분화병향유리우신경재생방향변화.