CAJ | 학술논문

背景:分化型胚胎软骨基因1 可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系.目的:构建针对人分化型胚胎软骨基因1 的小干扰RNA 表达载体.方法:从NCBI 中查找人分化型胚胎软骨基因1 基因全长mRNA 序列,利用Katahdin 提供的在线小干扰 RNA 模板序列设计软件,设计针对分化型胚胎软骨基因1 的2 条shRNA 的 DNA 模板单链,合成靶向分化型胚胎软骨基因1 基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 质粒连接,在JM-109 菌株中扩增,并进行质粒DNA 琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR 以及测序鉴定.结果与结论:将含有分化型胚胎软骨基因1 目标序列25 bp 的双链 DNA 插入片段,连接到pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 质粒形成重组质粒.质粒DNA 琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可用于后续实验.菌落PCR 结果表明产物大小约为170 bp,与预期相符.测序结果表明pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1 的干扰合成片段,无碱基突变.成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰 RNA 表达载体.
배경:분화형배태연골기인1 가조공종류생장、조망、쇠로상관인자,여종류적발생발전유착중요적련계.목적:구건침대인분화형배태연골기인1 적소간우RNA 표체재체.방법:종NCBI 중사조인분화형배태연골기인1 기인전장mRNA 서렬,이용Katahdin 제공적재선소간우 RNA 모판서렬설계연건,설계침대분화형배태연골기인1 적2 조shRNA 적 DNA 모판단련,합성파향분화형배태연골기인1 기인전록가형성경배결구적과취핵감산,퇴화후여매절후적pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 질립련접,재JM-109 균주중확증,병진행질립DNA 경지당응효전영분석、자외분광광도계검측、균락PCR 이급측서감정.결과여결론:장함유분화형배태연골기인1 목표서렬25 bp 적쌍련 DNA 삽입편단,련접도pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 질립형성중조질립.질립DNA 경지당응효전영화자외분광광도계분석결과학인소제질립순도교고,가용우후속실험.균락PCR 결과표명산물대소약위170 bp,여예기상부.측서결과표명pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 질립이경삽입인분화형배태연골기인1 적간우합성편단,무감기돌변.성공구건료파향분화형배태연골기인1-소간우 RNA 표체재체.