内蒙古农业大学学报（自然科学版）
內矇古農業大學學報（自然科學版）
내몽고농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF INNER MONGOLIA AGRICULTURAL UNIIVERSITY
2011年
4期
42-46
,共5页
刘金晔%白龙%郝永清%张爱荣
劉金曄%白龍%郝永清%張愛榮
류금엽%백룡%학영청%장애영
乳房炎停乳链球菌%MIG蛋白%克隆%原核表达%抗血清
乳房炎停乳鏈毬菌%MIG蛋白%剋隆%原覈錶達%抗血清
유방염정유련구균%MIG단백%극륭%원핵표체%항혈청
停乳链球菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌,根据GenBank中登陆的停乳链球菌表面蛋白MIG基因序列,设计一对引物,采用PCR的方法从临床分离的停乳链球菌内蒙分离株基因组DNA中扩增出MIG基因,得到1条1 900bp的片段.将其连入PMD - 19T载体中,经酶切,PCR及序列测定法进行鉴定.结果表明,MIG基因与GenBank中停乳链球菌MIG基因(AF354651)序列的同源性为95％.构建原核表达载体PET - 32a(+)- MIG,随后转化到大肠杆菌BL21( DH5a)中表达.表达产物进行SDS-PAGE分析后,表达的重组蛋白大小为89 ku.将纯化的MIG重组蛋白免疫兔,用ELISA检测其血清抗体.用制备出的抗血清与链球菌全菌进行玻片凝集试验,出现凝集颗粒.结果表明MIG重组蛋白具有较强的免疫原性,为停乳链球菌疫苗的研制奠定基础.
停乳鏈毬菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌,根據GenBank中登陸的停乳鏈毬菌錶麵蛋白MIG基因序列,設計一對引物,採用PCR的方法從臨床分離的停乳鏈毬菌內矇分離株基因組DNA中擴增齣MIG基因,得到1條1 900bp的片段.將其連入PMD - 19T載體中,經酶切,PCR及序列測定法進行鑒定.結果錶明,MIG基因與GenBank中停乳鏈毬菌MIG基因(AF354651)序列的同源性為95％.構建原覈錶達載體PET - 32a(+)- MIG,隨後轉化到大腸桿菌BL21( DH5a)中錶達.錶達產物進行SDS-PAGE分析後,錶達的重組蛋白大小為89 ku.將純化的MIG重組蛋白免疫兔,用ELISA檢測其血清抗體.用製備齣的抗血清與鏈毬菌全菌進行玻片凝集試驗,齣現凝集顆粒.結果錶明MIG重組蛋白具有較彊的免疫原性,為停乳鏈毬菌疫苗的研製奠定基礎.
정유련구균시인기내우유방염적주요병원균,근거GenBank중등륙적정유련구균표면단백MIG기인서렬,설계일대인물,채용PCR적방법종림상분리적정유련구균내몽분리주기인조DNA중확증출MIG기인,득도1조1 900bp적편단.장기련입PMD - 19T재체중,경매절,PCR급서렬측정법진행감정.결과표명,MIG기인여GenBank중정유련구균MIG기인(AF354651)서렬적동원성위95％.구건원핵표체재체PET - 32a(+)- MIG,수후전화도대장간균BL21( DH5a)중표체.표체산물진행SDS-PAGE분석후,표체적중조단백대소위89 ku.장순화적MIG중조단백면역토,용ELISA검측기혈청항체.용제비출적항혈청여련구균전균진행파편응집시험,출현응집과립.결과표명MIG중조단백구유교강적면역원성,위정유련구균역묘적연제전정기출.
