食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2012年
3期
302-306
,共5页
张天萌%沐万孟%江波%张涛%倪靓霞
張天萌%沐萬孟%江波%張濤%倪靚霞
장천맹%목만맹%강파%장도%예정하
谷氨酸脱羧酶%γ-氨基丁酸%克隆表达%亲和层析%细胞转化
穀氨痠脫羧酶%γ-氨基丁痠%剋隆錶達%親和層析%細胞轉化
곡안산탈최매%γ-안기정산%극륭표체%친화층석%세포전화
谷氨酸脱羧酶(GAD)是功能因子γ-氨基丁酸(GABA)生物合成过程中的重要酶.为了得到一种有高效活性的GAD基因工程菌,克隆到一种GAD基因,来源于微生物Lactococcus lactis subsp.lactis IL1403.以pET-22b(+)为载体质粒,Escherichia coli BL21 (DE3)为宿主细胞,构建了基因重组菌,IPTG可诱导目的重组GAD过量表达；经亲和层析纯化的重组蛋白质样品进行SDS-PAGE分析,在约54 000处出现显著的特征蛋白质条带；活性检测结果表明,该重组GAD的转化活性比野生菌株有明显提高,野生菌株经5h细胞转化,反应底物转化率为55.8％,而工程菌20 min后转化率达到82.1％,30 min后转化可达到98.3％.
穀氨痠脫羧酶(GAD)是功能因子γ-氨基丁痠(GABA)生物閤成過程中的重要酶.為瞭得到一種有高效活性的GAD基因工程菌,剋隆到一種GAD基因,來源于微生物Lactococcus lactis subsp.lactis IL1403.以pET-22b(+)為載體質粒,Escherichia coli BL21 (DE3)為宿主細胞,構建瞭基因重組菌,IPTG可誘導目的重組GAD過量錶達；經親和層析純化的重組蛋白質樣品進行SDS-PAGE分析,在約54 000處齣現顯著的特徵蛋白質條帶；活性檢測結果錶明,該重組GAD的轉化活性比野生菌株有明顯提高,野生菌株經5h細胞轉化,反應底物轉化率為55.8％,而工程菌20 min後轉化率達到82.1％,30 min後轉化可達到98.3％.
곡안산탈최매(GAD)시공능인자γ-안기정산(GABA)생물합성과정중적중요매.위료득도일충유고효활성적GAD기인공정균,극륭도일충GAD기인,래원우미생물Lactococcus lactis subsp.lactis IL1403.이pET-22b(+)위재체질립,Escherichia coli BL21 (DE3)위숙주세포,구건료기인중조균,IPTG가유도목적중조GAD과량표체；경친화층석순화적중조단백질양품진행SDS-PAGE분석,재약54 000처출현현저적특정단백질조대；활성검측결과표명,해중조GAD적전화활성비야생균주유명현제고,야생균주경5h세포전화,반응저물전화솔위55.8％,이공정균20 min후전화솔체도82.1％,30 min후전화가체도98.3％.
