CAJ | 학술논문

目的在毕赤酵母(P. pastoris)中分泌表达AChRα211,研究其对重症肌无力患者血清中AChRAb的清除作用. 方法以质粒pUC-AChRα211为模板,PCR扩增人AChRα211 DNA 片段,插入真核表达载体pPIC9K中.重组质粒转入P. pastoris GS115后,经甲醇诱导分泌表达AChRα211,用Sepharose Q离子交换柱和Superdex 75分子排阻层析进行纯化.Western blot 和ELISA进行免疫活性分析后,将目的蛋白偶联于CNBr-Sepharose 4B树脂上,研究该免疫吸附剂对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用. 结果双酶切鉴定和序列分析表明,AChRα211 DNA片段已正确插入到pPIC9K载体中.重组菌P. pastoris GS115/pPIC9K-AChRα211经甲醇诱导可分泌表达目的蛋白AChRα211,经阴离子交换柱和分子排阻层析可得95%纯AChRα211,并制备成免疫吸附剂.Western blot 和ELISA分析表明,重组蛋白具有与天然AChRα亚基相似的免疫活性.免疫吸附实验表明该重组蛋白可特异性地去除肌无力患者血清中的AChRAb. 结论在P. pastoris中分泌表达并纯化重组蛋白AChRα211,制备成一种新的免疫吸附剂AChRα211-Sepharose,可清除肌无力患者血清中的AChRAb.
목적재필적효모(P. pastoris)중분비표체AChRα211,연구기대중증기무력환자혈청중AChRAb적청제작용. 방법이질립pUC-AChRα211위모판,PCR확증인AChRα211 DNA 편단,삽입진핵표체재체pPIC9K중.중조질립전입P. pastoris GS115후,경갑순유도분비표체AChRα211,용Sepharose Q리자교환주화Superdex 75분자배조층석진행순화.Western blot 화ELISA진행면역활성분석후,장목적단백우련우CNBr-Sepharose 4B수지상,연구해면역흡부제대기무력환자혈청중AChRAb적청제작용. 결과쌍매절감정화서렬분석표명,AChRα211 DNA편단이정학삽입도pPIC9K재체중.중조균P. pastoris GS115/pPIC9K-AChRα211경갑순유도가분비표체목적단백AChRα211,경음리자교환주화분자배조층석가득95%순AChRα211,병제비성면역흡부제.Western blot 화ELISA분석표명,중조단백구유여천연AChRα아기상사적면역활성.면역흡부실험표명해중조단백가특이성지거제기무력환자혈청중적AChRAb. 결론재P. pastoris중분비표체병순화중조단백AChRα211,제비성일충신적면역흡부제AChRα211-Sepharose,가청제기무력환자혈청중적AChRAb.