浙江大学学报（工学版）
浙江大學學報（工學版）
절강대학학보（공학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(ENGINEERING SCIENCE)
2005年
5期
756-760
,共5页
单链抗体%G-CSF抗原%克隆%表达
單鏈抗體%G-CSF抗原%剋隆%錶達
단련항체%G-CSF항원%극륭%표체
从构建的噬菌体表面展示文库中,筛选出全新的人源抗重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)特异单链抗体(ScFv)的噬菌体克隆.ScFv被克隆到pCANTAB 5E载体上,以E.coli TG1为宿主,进行噬菌体表面呈现,以rhG-CSF为靶抗原进行免疫亲和富集筛选,经酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定,得到一株高亲和力克隆.DNA序列分析表明,该ScFv基因全长733 bp,其中重链可变区(VH)为366 bp,轻链可变区(VL)为322bp.抗rhG-CSF的ScFv在E. coli HB2151中以可溶形式分泌表达,产物主要分布于周质中,占周质总蛋白的质量分数为20%～25%,经免疫印迹试验(Western-blot)分析显示该单链抗体黏均分子量为31 kD.
從構建的噬菌體錶麵展示文庫中,篩選齣全新的人源抗重組人粒細胞集落刺激因子(rhG-CSF)特異單鏈抗體(ScFv)的噬菌體剋隆.ScFv被剋隆到pCANTAB 5E載體上,以E.coli TG1為宿主,進行噬菌體錶麵呈現,以rhG-CSF為靶抗原進行免疫親和富集篩選,經酶聯免疫吸附試驗(ELISA)鑒定,得到一株高親和力剋隆.DNA序列分析錶明,該ScFv基因全長733 bp,其中重鏈可變區(VH)為366 bp,輕鏈可變區(VL)為322bp.抗rhG-CSF的ScFv在E. coli HB2151中以可溶形式分泌錶達,產物主要分佈于週質中,佔週質總蛋白的質量分數為20%～25%,經免疫印跡試驗(Western-blot)分析顯示該單鏈抗體黏均分子量為31 kD.
종구건적서균체표면전시문고중,사선출전신적인원항중조인립세포집락자격인자(rhG-CSF)특이단련항체(ScFv)적서균체극륭.ScFv피극륭도pCANTAB 5E재체상,이E.coli TG1위숙주,진행서균체표면정현,이rhG-CSF위파항원진행면역친화부집사선,경매련면역흡부시험(ELISA)감정,득도일주고친화력극륭.DNA서렬분석표명,해ScFv기인전장733 bp,기중중련가변구(VH)위366 bp,경련가변구(VL)위322bp.항rhG-CSF적ScFv재E. coli HB2151중이가용형식분비표체,산물주요분포우주질중,점주질총단백적질량분수위20%～25%,경면역인적시험(Western-blot)분석현시해단련항체점균분자량위31 kD.
