第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2006年
3期
205-207
,共3页
邓少丽%胡福泉%蹇锐%饶贤才%蒋静%程小星
鄧少麗%鬍福泉%蹇銳%饒賢纔%蔣靜%程小星
산소려%호복천%건예%요현재%장정%정소성
Blimp-1%原核表达%抗体制备
Blimp-1%原覈錶達%抗體製備
Blimp-1%원핵표체%항체제비
目的获得Blimp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础.方法采用PCR方法从Blimp-1质粒中克隆Blimp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建Blimp-1与6个His的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备Blimp-1多抗.采用ELISA方法检测其效价,Western检验抗体特异性及在骨髓瘤细胞株中的表达.结果构建了表达Blimp-1前350个氨基酸的原核表达质粒PQE-Blimp-1,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,得到分子量约46×103的融合蛋白,免疫家兔后得到多抗血清.ELISA显示抗体效价达1/20 000.Westernblot结果显示此多克隆抗体与Blimp-1蛋白特异性结合,并在骨髓瘤细胞中表达.结论本研究获得Blimp-1纯化蛋白,制备了Blimp-1多克隆抗体,为进一步研究Blimp-1的作用机制及与血液疾病间的关系奠定了基础.
目的穫得Blimp-1純化蛋白,製備多剋隆抗體,為研究漿細胞髮育的調控奠定基礎.方法採用PCR方法從Blimp-1質粒中剋隆Blimp-1編碼前350箇氨基痠的基因片段,構建Blimp-1與6箇His的融閤蛋白原覈錶達質粒,進行原覈錶達與蛋白純化後,免疫動物,製備Blimp-1多抗.採用ELISA方法檢測其效價,Western檢驗抗體特異性及在骨髓瘤細胞株中的錶達.結果構建瞭錶達Blimp-1前350箇氨基痠的原覈錶達質粒PQE-Blimp-1,經過大腸桿菌錶達、鎳親和層析柱純化,得到分子量約46×103的融閤蛋白,免疫傢兔後得到多抗血清.ELISA顯示抗體效價達1/20 000.Westernblot結果顯示此多剋隆抗體與Blimp-1蛋白特異性結閤,併在骨髓瘤細胞中錶達.結論本研究穫得Blimp-1純化蛋白,製備瞭Blimp-1多剋隆抗體,為進一步研究Blimp-1的作用機製及與血液疾病間的關繫奠定瞭基礎.
목적획득Blimp-1순화단백,제비다극륭항체,위연구장세포발육적조공전정기출.방법채용PCR방법종Blimp-1질립중극륭Blimp-1편마전350개안기산적기인편단,구건Blimp-1여6개His적융합단백원핵표체질립,진행원핵표체여단백순화후,면역동물,제비Blimp-1다항.채용ELISA방법검측기효개,Western검험항체특이성급재골수류세포주중적표체.결과구건료표체Blimp-1전350개안기산적원핵표체질립PQE-Blimp-1,경과대장간균표체、얼친화층석주순화,득도분자량약46×103적융합단백,면역가토후득도다항혈청.ELISA현시항체효개체1/20 000.Westernblot결과현시차다극륭항체여Blimp-1단백특이성결합,병재골수류세포중표체.결론본연구획득Blimp-1순화단백,제비료Blimp-1다극륭항체,위진일보연구Blimp-1적작용궤제급여혈액질병간적관계전정료기출.
