基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2007年
12期
1324-1328
,共5页
人可溶性肿瘤坏死因子受体1%真核表达%瞬时转染%细胞毒性作用
人可溶性腫瘤壞死因子受體1%真覈錶達%瞬時轉染%細胞毒性作用
인가용성종류배사인자수체1%진핵표체%순시전염%세포독성작용
目的 构建人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因(sTNFR1)的真核表达载体,研究sTNFR1对TNF-α细胞毒效应的抑制作用.方法 以HeLa细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增人sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及真核表达载体pcDNA3.1(-)重组质粒亚克隆,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1(-).sTNFR1瞬时转染QSG7701细胞,半定量PT-PCR法检测sTNFR1 mRNA的表达,MTT法检测sTNFR1对TNF-α细胞毒效应的抑制作用.结果 人sTNFR1基因被正确克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-);通过与3-磷酸甘油醛(GAPDH)比较,pcDNA3.1(-)-sTNFR1转染的QSG7701细胞中sTNFR1 mRNA表达量明显高于空载体对照组和空细胞对照组(P＜0.05);pcDNA3.1(-)-sTNFR1瞬时转染QSG7701细胞,TNF-α对其细胞毒性作用受到抑制,当TNF-α浓度为100μg/L时pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701的细胞毒性较QSG7701下降64.8%.结论 成功地构建真核表达质pcDNA3.1(-)-sTNFR1,TNF-α对瞬时转染pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701的细胞株细胞毒性作用受到抑制.
目的 構建人可溶性腫瘤壞死因子受體1基因(sTNFR1)的真覈錶達載體,研究sTNFR1對TNF-α細胞毒效應的抑製作用.方法 以HeLa細胞的總RNA為模闆,用RT-PCR方法擴增人sTNFR1全編碼區基因片段,構建含有目的片段的T載體剋隆及真覈錶達載體pcDNA3.1(-)重組質粒亞剋隆,用脂質體法將重組質粒pcDNA3.1(-).sTNFR1瞬時轉染QSG7701細胞,半定量PT-PCR法檢測sTNFR1 mRNA的錶達,MTT法檢測sTNFR1對TNF-α細胞毒效應的抑製作用.結果 人sTNFR1基因被正確剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1(-);通過與3-燐痠甘油醛(GAPDH)比較,pcDNA3.1(-)-sTNFR1轉染的QSG7701細胞中sTNFR1 mRNA錶達量明顯高于空載體對照組和空細胞對照組(P＜0.05);pcDNA3.1(-)-sTNFR1瞬時轉染QSG7701細胞,TNF-α對其細胞毒性作用受到抑製,噹TNF-α濃度為100μg/L時pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701的細胞毒性較QSG7701下降64.8%.結論 成功地構建真覈錶達質pcDNA3.1(-)-sTNFR1,TNF-α對瞬時轉染pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701的細胞株細胞毒性作用受到抑製.
목적 구건인가용성종류배사인자수체1기인(sTNFR1)적진핵표체재체,연구sTNFR1대TNF-α세포독효응적억제작용.방법 이HeLa세포적총RNA위모판,용RT-PCR방법확증인sTNFR1전편마구기인편단,구건함유목적편단적T재체극륭급진핵표체재체pcDNA3.1(-)중조질립아극륭,용지질체법장중조질립pcDNA3.1(-).sTNFR1순시전염QSG7701세포,반정량PT-PCR법검측sTNFR1 mRNA적표체,MTT법검측sTNFR1대TNF-α세포독효응적억제작용.결과 인sTNFR1기인피정학극륭입진핵표체재체pcDNA3.1(-);통과여3-린산감유철(GAPDH)비교,pcDNA3.1(-)-sTNFR1전염적QSG7701세포중sTNFR1 mRNA표체량명현고우공재체대조조화공세포대조조(P＜0.05);pcDNA3.1(-)-sTNFR1순시전염QSG7701세포,TNF-α대기세포독성작용수도억제,당TNF-α농도위100μg/L시pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701적세포독성교QSG7701하강64.8%.결론 성공지구건진핵표체질pcDNA3.1(-)-sTNFR1,TNF-α대순시전염pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701적세포주세포독성작용수도억제.
