园艺学报
園藝學報
완예학보
ACTA HORTICULTURAE SINICA
2008年
4期
565-570
,共6页
张妙彬%梁擎中%肖浩%岑鹏%范干群%潘丽晶
張妙彬%樑擎中%肖浩%岑鵬%範榦群%潘麗晶
장묘빈%량경중%초호%잠붕%범간군%반려정
石斛兰%GUS%根癌农杆菌%转化%Southern杂交
石斛蘭%GUS%根癌農桿菌%轉化%Southern雜交
석곡란%GUS%근암농간균%전화%Southern잡교
利用根癌农杆菌介导转化石斛兰类原球茎(PLBs),研究了石斛兰对潮霉素的敏感性,并通过gus瞬时表达率比较不同类型农杆菌、侵染液浓度及乙酰丁香酮(AS)等对石斛兰转化的影响.结果表明:带有pCAMBIA1301的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105(简称为E1301)比带有相同表达载体的LBA4404(简称L1301)对石斛兰的转化效率更高,前者约为后者的6倍;较高浓度的侵染液转化效率更高(OD600为1.0或1.2时的转化效率约为OD600为0.6或0.8时的2倍);在农杆菌生长至OD600值为0.8时,添加AS可提高转化效率;而当OD600为0.6、1.0和1.2时,添加AS反而不同程度地降低转化效率; 在各种处理中,OD600为1.0时不添加AS的转化效率最高,达44.4%.经过5～6个月选择培养,抗性小苗经GUS染色、PCR和Southern杂交检测证明为转基因植株.
利用根癌農桿菌介導轉化石斛蘭類原毬莖(PLBs),研究瞭石斛蘭對潮黴素的敏感性,併通過gus瞬時錶達率比較不同類型農桿菌、侵染液濃度及乙酰丁香酮(AS)等對石斛蘭轉化的影響.結果錶明:帶有pCAMBIA1301的根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105(簡稱為E1301)比帶有相同錶達載體的LBA4404(簡稱L1301)對石斛蘭的轉化效率更高,前者約為後者的6倍;較高濃度的侵染液轉化效率更高(OD600為1.0或1.2時的轉化效率約為OD600為0.6或0.8時的2倍);在農桿菌生長至OD600值為0.8時,添加AS可提高轉化效率;而噹OD600為0.6、1.0和1.2時,添加AS反而不同程度地降低轉化效率; 在各種處理中,OD600為1.0時不添加AS的轉化效率最高,達44.4%.經過5～6箇月選擇培養,抗性小苗經GUS染色、PCR和Southern雜交檢測證明為轉基因植株.
이용근암농간균개도전화석곡란류원구경(PLBs),연구료석곡란대조매소적민감성,병통과gus순시표체솔비교불동류형농간균、침염액농도급을선정향동(AS)등대석곡란전화적영향.결과표명:대유pCAMBIA1301적근암농간균(Agrobacterium tumefaciens)EHA105(간칭위E1301)비대유상동표체재체적LBA4404(간칭L1301)대석곡란적전화효솔경고,전자약위후자적6배;교고농도적침염액전화효솔경고(OD600위1.0혹1.2시적전화효솔약위OD600위0.6혹0.8시적2배);재농간균생장지OD600치위0.8시,첨가AS가제고전화효솔;이당OD600위0.6、1.0화1.2시,첨가AS반이불동정도지강저전화효솔; 재각충처리중,OD600위1.0시불첨가AS적전화효솔최고,체44.4%.경과5～6개월선택배양,항성소묘경GUS염색、PCR화Southern잡교검측증명위전기인식주.
