中华实验和临床感染病杂志（电子版）
中華實驗和臨床感染病雜誌（電子版）
중화실험화림상감염병잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL INFECTIOUS DISEASES(ELECTRONIC VERSION)
2008年
1期
13-18
,共6页
金琳琳%李鹏%万言珍%岳盈盈%李志会%孟红
金琳琳%李鵬%萬言珍%嶽盈盈%李誌會%孟紅
금림림%리붕%만언진%악영영%리지회%맹홍
VP4%轮状病毒%原核表达
VP4%輪狀病毒%原覈錶達
VP4%륜상병독%원핵표체
目的 克隆表达轮状病毒融合素蛋白VP4.方法 以轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板,经RT-PCR获得VP4全长基因片段cDNA,将其重组于pET-30a(+)表达载体,转化大肠埃希菌BL21(plysS),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并用镍柱纯化.结果 重组载体所含目的基因片段的序列与文献公布序列相符,IPTG诱导表达的目的蛋白主要以包涵体形式存在;SDS-PAGE检测表达产物与目的蛋白大小一致,为88 kD,Western blot检测发现目的蛋白所带组氨酸标签可与标签抗体反应;镍柱纯化获得RV SA11 VP4融合素蛋白,纯度达90%.结论 构建了表达载体pET-30a(+)-VP4,经诱导表达、纯化,获得了RV融合素蛋白VP4.
目的 剋隆錶達輪狀病毒融閤素蛋白VP4.方法 以輪狀病毒SA11株細胞培養物提取總RNA為模闆,經RT-PCR穫得VP4全長基因片段cDNA,將其重組于pET-30a(+)錶達載體,轉化大腸埃希菌BL21(plysS),異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,錶達產物經SDS-PAGE和Western blot鑒定,併用鎳柱純化.結果 重組載體所含目的基因片段的序列與文獻公佈序列相符,IPTG誘導錶達的目的蛋白主要以包涵體形式存在;SDS-PAGE檢測錶達產物與目的蛋白大小一緻,為88 kD,Western blot檢測髮現目的蛋白所帶組氨痠標籤可與標籤抗體反應;鎳柱純化穫得RV SA11 VP4融閤素蛋白,純度達90%.結論 構建瞭錶達載體pET-30a(+)-VP4,經誘導錶達、純化,穫得瞭RV融閤素蛋白VP4.
목적 극륭표체륜상병독융합소단백VP4.방법 이륜상병독SA11주세포배양물제취총RNA위모판,경RT-PCR획득VP4전장기인편단cDNA,장기중조우pET-30a(+)표체재체,전화대장애희균BL21(plysS),이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,표체산물경SDS-PAGE화Western blot감정,병용얼주순화.결과 중조재체소함목적기인편단적서렬여문헌공포서렬상부,IPTG유도표체적목적단백주요이포함체형식존재;SDS-PAGE검측표체산물여목적단백대소일치,위88 kD,Western blot검측발현목적단백소대조안산표첨가여표첨항체반응;얼주순화획득RV SA11 VP4융합소단백,순도체90%.결론 구건료표체재체pET-30a(+)-VP4,경유도표체、순화,획득료RV융합소단백VP4.
