中国血吸虫病防治杂志
中國血吸蟲病防治雜誌
중국혈흡충병방치잡지
CHINESE JOURNAL OF SCHISTOSOMIASIS CONTROL
2010年
5期
437-441
,共5页
钱春艳%余传信%宋丽君%殷旭仁%王玠%许永良%华万全
錢春豔%餘傳信%宋麗君%慇旭仁%王玠%許永良%華萬全
전춘염%여전신%송려군%은욱인%왕개%허영량%화만전
日本血吸虫%14-3-3蛋白%单克隆抗体%制备%鉴定
日本血吸蟲%14-3-3蛋白%單剋隆抗體%製備%鑒定
일본혈흡충%14-3-3단백%단극륭항체%제비%감정
目的 制备抗日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3单克隆抗体,并鉴定抗体性质.方法 以重组表达纯化的日本血吸虫信号蛋白14-3-3为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验及免疫印迹法对获得的单克隆抗体进行类和亚类、效价、浓度、纯度、亲和常数、特异性和检测灵敏度的测定与鉴定.结果 共获得6株针对日本血吸虫信号蛋白14-3-3的单克隆抗体,分别为5G9、3F1、3F7、5C6、5D1和1G6,抗体类型分别为IgG1、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG1和IgG1.对其中的单克隆抗体5G9分析显示,制备的腹水抗体效价为1:1.28×105,亲和层析纯化后的浓度为5.3 mg/ml,纯度＞95%,亲和常数为5.1×107mol/L.免疫印迹试验结果表明,该单克隆抗体可与体外重组表达纯化的日本血吸虫14-3-3蛋白特异性结合,同时也能与日本血吸虫可溶性虫卵抗原、成虫排泄分泌抗原和成虫抗原特异性反应,而与大肠埃希菌、健康人血清和华支睾吸虫抗原均无明显交叉反应.HRP标记的单克隆抗体5G9检测14-3-3蛋白的灵敏度为31.25 ng/ml.结论 本研究获得了6株能稳定分泌抗日本血吸虫14-3-3蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为建立新的日本血吸虫活动性感染检测方法奠定了良好的基础.
目的 製備抗日本血吸蟲重組信號蛋白14-3-3單剋隆抗體,併鑒定抗體性質.方法 以重組錶達純化的日本血吸蟲信號蛋白14-3-3為抗原免疫BALB/c小鼠,採用雜交瘤技術製備單剋隆抗體,採用酶聯免疫吸附試驗及免疫印跡法對穫得的單剋隆抗體進行類和亞類、效價、濃度、純度、親和常數、特異性和檢測靈敏度的測定與鑒定.結果 共穫得6株針對日本血吸蟲信號蛋白14-3-3的單剋隆抗體,分彆為5G9、3F1、3F7、5C6、5D1和1G6,抗體類型分彆為IgG1、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG1和IgG1.對其中的單剋隆抗體5G9分析顯示,製備的腹水抗體效價為1:1.28×105,親和層析純化後的濃度為5.3 mg/ml,純度＞95%,親和常數為5.1×107mol/L.免疫印跡試驗結果錶明,該單剋隆抗體可與體外重組錶達純化的日本血吸蟲14-3-3蛋白特異性結閤,同時也能與日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原、成蟲排洩分泌抗原和成蟲抗原特異性反應,而與大腸埃希菌、健康人血清和華支睪吸蟲抗原均無明顯交扠反應.HRP標記的單剋隆抗體5G9檢測14-3-3蛋白的靈敏度為31.25 ng/ml.結論 本研究穫得瞭6株能穩定分泌抗日本血吸蟲14-3-3蛋白的單剋隆抗體雜交瘤細胞株,為建立新的日本血吸蟲活動性感染檢測方法奠定瞭良好的基礎.
목적 제비항일본혈흡충중조신호단백14-3-3단극륭항체,병감정항체성질.방법 이중조표체순화적일본혈흡충신호단백14-3-3위항원면역BALB/c소서,채용잡교류기술제비단극륭항체,채용매련면역흡부시험급면역인적법대획득적단극륭항체진행류화아류、효개、농도、순도、친화상수、특이성화검측령민도적측정여감정.결과 공획득6주침대일본혈흡충신호단백14-3-3적단극륭항체,분별위5G9、3F1、3F7、5C6、5D1화1G6,항체류형분별위IgG1、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG1화IgG1.대기중적단극륭항체5G9분석현시,제비적복수항체효개위1:1.28×105,친화층석순화후적농도위5.3 mg/ml,순도＞95%,친화상수위5.1×107mol/L.면역인적시험결과표명,해단극륭항체가여체외중조표체순화적일본혈흡충14-3-3단백특이성결합,동시야능여일본혈흡충가용성충란항원、성충배설분비항원화성충항원특이성반응,이여대장애희균、건강인혈청화화지고흡충항원균무명현교차반응.HRP표기적단극륭항체5G9검측14-3-3단백적령민도위31.25 ng/ml.결론 본연구획득료6주능은정분비항일본혈흡충14-3-3단백적단극륭항체잡교류세포주,위건립신적일본혈흡충활동성감염검측방법전정료량호적기출.
