口腔生物医学
口腔生物醫學
구강생물의학
ORAL BIOMEDICINE
2011年
1期
17-20,25
,共5页
江飞%袁华%丁思阳%牛玉明%杜一飞%陈宁
江飛%袁華%丁思暘%牛玉明%杜一飛%陳寧
강비%원화%정사양%우옥명%두일비%진저
E2F-1%RNA干扰%口腔鳞癌%慢病毒载体
E2F-1%RNA榦擾%口腔鱗癌%慢病毒載體
E2F-1%RNA간우%구강린암%만병독재체
目的:构建和鉴定靶向E2F-1基因的RNA干扰慢病毒载体.方法:体外合成两对互补并编码靶向E2F-1基因的特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列和一个阴性对照组的寡核苷酸,克隆到pLKO.1-PURO-U6(Age I/EcoR I)质粒载体中,经酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确,将以上质粒分别和包装质粒混合物共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒.各组病毒载体转染Tca8113细胞后,运用Real-Time PCR 和Western检测三组E2F-1 mRNA和蛋白的表达水平.结果:经酶切和测序证明,pLKO.1-PURO-U6-E2F-1shRNA序列正确;转染后,各组慢病毒载体中,第一组质粒感染后的Tca8113细胞中E2F-1基因的核酸电泳条带明显减弱,Western检测出E2F-1蛋白的表达降低.结论:靶向E2F-1基因的shRNA慢病毒载体构建成功,并可特异性沉默E2F-1基因的表达,为研究E2F-1在口腔鳞癌的发生发展中的作用提供了初步的实验基础.
目的:構建和鑒定靶嚮E2F-1基因的RNA榦擾慢病毒載體.方法:體外閤成兩對互補併編碼靶嚮E2F-1基因的特異性短髮夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列和一箇陰性對照組的寡覈苷痠,剋隆到pLKO.1-PURO-U6(Age I/EcoR I)質粒載體中,經酶切和測序鑒定所構建的重組載體是否正確,將以上質粒分彆和包裝質粒混閤物共轉染293T細胞,包裝產生病毒顆粒.各組病毒載體轉染Tca8113細胞後,運用Real-Time PCR 和Western檢測三組E2F-1 mRNA和蛋白的錶達水平.結果:經酶切和測序證明,pLKO.1-PURO-U6-E2F-1shRNA序列正確;轉染後,各組慢病毒載體中,第一組質粒感染後的Tca8113細胞中E2F-1基因的覈痠電泳條帶明顯減弱,Western檢測齣E2F-1蛋白的錶達降低.結論:靶嚮E2F-1基因的shRNA慢病毒載體構建成功,併可特異性沉默E2F-1基因的錶達,為研究E2F-1在口腔鱗癌的髮生髮展中的作用提供瞭初步的實驗基礎.
목적:구건화감정파향E2F-1기인적RNA간우만병독재체.방법:체외합성량대호보병편마파향E2F-1기인적특이성단발협RNA(short hairpin RNA,shRNA)서렬화일개음성대조조적과핵감산,극륭도pLKO.1-PURO-U6(Age I/EcoR I)질립재체중,경매절화측서감정소구건적중조재체시부정학,장이상질립분별화포장질립혼합물공전염293T세포,포장산생병독과립.각조병독재체전염Tca8113세포후,운용Real-Time PCR 화Western검측삼조E2F-1 mRNA화단백적표체수평.결과:경매절화측서증명,pLKO.1-PURO-U6-E2F-1shRNA서렬정학;전염후,각조만병독재체중,제일조질립감염후적Tca8113세포중E2F-1기인적핵산전영조대명현감약,Western검측출E2F-1단백적표체강저.결론:파향E2F-1기인적shRNA만병독재체구건성공,병가특이성침묵E2F-1기인적표체,위연구E2F-1재구강린암적발생발전중적작용제공료초보적실험기출.
