中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2011年
21期
4199-4202
,共4页
石超%蔡哲%范林洋%裴斐%杨超%杨春蕾
石超%蔡哲%範林洋%裴斐%楊超%楊春蕾
석초%채철%범림양%배비%양초%양춘뢰
细胞周期蛋白E%Eca-109细胞%RNA干扰%增殖
細胞週期蛋白E%Eca-109細胞%RNA榦擾%增殖
세포주기단백E%Eca-109세포%RNA간우%증식
目的 探讨利用RNAi技术抑制cyclin E的表达,研究cyclin E在食道癌细胞Eca-109生长、增殖过程中的作用.方法 设计针对cyclin E基因的siRNA序列,合成并克隆入pGFU6/neo质粒中,用脂质体转染法将重组质粒转染Eca-109细胞.采用RT-PCR和免疫印迹试验检测稳定转染的Eca-109细胞中cyclin E的表达水平.台盼蓝排斥法、MTT法、3H-TdR掺人试验、平板克隆形成试验检测干扰cyclin E后对细胞活力以及增殖能力的影响,流式细胞仪测定细胞周期时相分布.Westem印迹检测细胞增殖有关蛋白PCNA、p21、bax和bcl-2表达变化.结果 台盼蓝排斥法、MTT法、3H-TdR掺入试验和平板克隆形成试验显示转染组细胞活力及增殖受到抑制；阻滞在G0/G1期细胞比例增加.Western印迹表明PCNA和bcl-2蛋白表达量下降；而p21蛋白和Bax蛋白表达量上升.结论 沉默cyclin E基因能明显抑制食道癌细胞Eca-109的活力及增殖能力,并且细胞周期被阻滞,机制可能与下调肿瘤细胞内PCNA以及上调p21的表达有关.
目的 探討利用RNAi技術抑製cyclin E的錶達,研究cyclin E在食道癌細胞Eca-109生長、增殖過程中的作用.方法 設計針對cyclin E基因的siRNA序列,閤成併剋隆入pGFU6/neo質粒中,用脂質體轉染法將重組質粒轉染Eca-109細胞.採用RT-PCR和免疫印跡試驗檢測穩定轉染的Eca-109細胞中cyclin E的錶達水平.檯盼藍排斥法、MTT法、3H-TdR摻人試驗、平闆剋隆形成試驗檢測榦擾cyclin E後對細胞活力以及增殖能力的影響,流式細胞儀測定細胞週期時相分佈.Westem印跡檢測細胞增殖有關蛋白PCNA、p21、bax和bcl-2錶達變化.結果 檯盼藍排斥法、MTT法、3H-TdR摻入試驗和平闆剋隆形成試驗顯示轉染組細胞活力及增殖受到抑製；阻滯在G0/G1期細胞比例增加.Western印跡錶明PCNA和bcl-2蛋白錶達量下降；而p21蛋白和Bax蛋白錶達量上升.結論 沉默cyclin E基因能明顯抑製食道癌細胞Eca-109的活力及增殖能力,併且細胞週期被阻滯,機製可能與下調腫瘤細胞內PCNA以及上調p21的錶達有關.
목적 탐토이용RNAi기술억제cyclin E적표체,연구cyclin E재식도암세포Eca-109생장、증식과정중적작용.방법 설계침대cyclin E기인적siRNA서렬,합성병극륭입pGFU6/neo질립중,용지질체전염법장중조질립전염Eca-109세포.채용RT-PCR화면역인적시험검측은정전염적Eca-109세포중cyclin E적표체수평.태반람배척법、MTT법、3H-TdR참인시험、평판극륭형성시험검측간우cyclin E후대세포활력이급증식능력적영향,류식세포의측정세포주기시상분포.Westem인적검측세포증식유관단백PCNA、p21、bax화bcl-2표체변화.결과 태반람배척법、MTT법、3H-TdR참입시험화평판극륭형성시험현시전염조세포활력급증식수도억제；조체재G0/G1기세포비례증가.Western인적표명PCNA화bcl-2단백표체량하강；이p21단백화Bax단백표체량상승.결론 침묵cyclin E기인능명현억제식도암세포Eca-109적활력급증식능력,병차세포주기피조체,궤제가능여하조종류세포내PCNA이급상조p21적표체유관.
