生物加工过程
生物加工過程
생물가공과정
CHINESE JOURNAL OF BIOPROCESS ENGINEERING
2012年
5期
55-60
,共6页
付莉莉%关波%雷楗勇%段作营%陈蕴%金坚%李华钟
付莉莉%關波%雷楗勇%段作營%陳蘊%金堅%李華鐘
부리리%관파%뢰건용%단작영%진온%금견%리화종
人血清白蛋白%乳酸克鲁维酵母%分泌表达
人血清白蛋白%乳痠剋魯維酵母%分泌錶達
인혈청백단백%유산극로유효모%분비표체
以乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis,K.lactis)GG799为宿主对人血清白蛋白(HSA)进行分泌表达.以pPIC9k-HSA为模板,采用带有Xho Ⅰ和NotⅠ酶切位点的引物PCR扩增获得HSA基因,经XhoI和NotI双酶切后插入pKLAC1,构建表达载体pKLAC1 -HSA.经SalⅡ线性化后,电击转化K.lactis GG799,用含5 mmol/L乙酰胺的YCB平板筛选阳性转化子.提取基因组DNA,采用PCR方法对转化子鉴定后进行摇瓶发酵.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot分析发酵上清液中的表达产物,并初步分析酵母基础N源(YNB)对HSA在K.lactis GG799中表达的影响.结果表明,HSA成功在K.lactis GG799中分泌表达,表达量为81μg/mL,遗传稳定性好.
以乳痠剋魯維酵母(Kluyveromyces lactis,K.lactis)GG799為宿主對人血清白蛋白(HSA)進行分泌錶達.以pPIC9k-HSA為模闆,採用帶有Xho Ⅰ和NotⅠ酶切位點的引物PCR擴增穫得HSA基因,經XhoI和NotI雙酶切後插入pKLAC1,構建錶達載體pKLAC1 -HSA.經SalⅡ線性化後,電擊轉化K.lactis GG799,用含5 mmol/L乙酰胺的YCB平闆篩選暘性轉化子.提取基因組DNA,採用PCR方法對轉化子鑒定後進行搖瓶髮酵.十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)及Western blot分析髮酵上清液中的錶達產物,併初步分析酵母基礎N源(YNB)對HSA在K.lactis GG799中錶達的影響.結果錶明,HSA成功在K.lactis GG799中分泌錶達,錶達量為81μg/mL,遺傳穩定性好.
이유산극로유효모(Kluyveromyces lactis,K.lactis)GG799위숙주대인혈청백단백(HSA)진행분비표체.이pPIC9k-HSA위모판,채용대유Xho Ⅰ화NotⅠ매절위점적인물PCR확증획득HSA기인,경XhoI화NotI쌍매절후삽입pKLAC1,구건표체재체pKLAC1 -HSA.경SalⅡ선성화후,전격전화K.lactis GG799,용함5 mmol/L을선알적YCB평판사선양성전화자.제취기인조DNA,채용PCR방법대전화자감정후진행요병발효.십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)급Western blot분석발효상청액중적표체산물,병초보분석효모기출N원(YNB)대HSA재K.lactis GG799중표체적영향.결과표명,HSA성공재K.lactis GG799중분비표체,표체량위81μg/mL,유전은정성호.
