CAJ | 학술논문

目的研究一种变异的流感病毒非结构蛋白(NS1)对干扰素调节因子3(IRF-3)抑制作用的影响.方法用A/FM/1/47、A/HK/1/68、A/HK/1/68-MA20、A/HK/1/68-MA20C和阳性对照Sendai病毒(SV)感染HEK293细胞,Western blot比较这些病毒感染后磷酸化的迁移较慢的IRF-3Ⅲ和Ⅳ型是否出现.亚克隆A/HK/1/68的野生型NS1和A/HK/1/68-MA20的变异型NS1至pcDNA3.1-flag构建flag-NS1野生型,flag-NS1变异型质粒,分别用两种质粒转染HEK293细胞,转染后16 h,感染SV 8 h,然后收集细胞,作Western印迹分析,用抗flag抗体鉴定野生型和变异型NS1的表达,用抗IRF-3抗体观测NS1对SV活化IRF-3的抑制作用,用荧光素酶功能分析的方法观测两种NS1对SV诱导的干扰素β启动子-pGL-2B荧光素酶活性的影响.结果感染的5种病毒中仅毒性较低的A/HK/1/68-MA20和阳性对照SV能使IRF-3磷酸化,感染MA20后9 h开始有IRF-3磷酸化,23 h和26 h最强,比较A/HK/1/68和A/HK/1/68-MA20的NS1序列,发现从cDNA起始的第94位核苷酸由T变成C,蛋白质的第23位由缬氨酸变成丙氨酸.NS1野生型和变异型均有高表达.结论 A/HK/1/68-MA20的NS1的点变异可导致失去野生型NS1的抑制干扰素β启动子活性的作用.
목적연구일충변이적류감병독비결구단백(NS1)대간우소조절인자3(IRF-3)억제작용적영향.방법용A/FM/1/47、A/HK/1/68、A/HK/1/68-MA20、A/HK/1/68-MA20C화양성대조Sendai병독(SV)감염HEK293세포,Western blot비교저사병독감염후린산화적천이교만적IRF-3Ⅲ화Ⅳ형시부출현.아극륭A/HK/1/68적야생형NS1화A/HK/1/68-MA20적변이형NS1지pcDNA3.1-flag구건flag-NS1야생형,flag-NS1변이형질립,분별용량충질립전염HEK293세포,전염후16 h,감염SV 8 h,연후수집세포,작Western인적분석,용항flag항체감정야생형화변이형NS1적표체,용항IRF-3항체관측NS1대SV활화IRF-3적억제작용,용형광소매공능분석적방법관측량충NS1대SV유도적간우소β계동자-pGL-2B형광소매활성적영향.결과감염적5충병독중부독성교저적A/HK/1/68-MA20화양성대조SV능사IRF-3린산화,감염MA20후9 h개시유IRF-3린산화,23 h화26 h최강,비교A/HK/1/68화A/HK/1/68-MA20적NS1서렬,발현종cDNA기시적제94위핵감산유T변성C,단백질적제23위유힐안산변성병안산.NS1야생형화변이형균유고표체.결론 A/HK/1/68-MA20적NS1적점변이가도치실거야생형NS1적억제간우소β계동자활성적작용.