CAJ | 학술논문

为了将合成的核酸探针点样到玻片上制备成基因芯片,先用常规PCR扩增动物组织中钩端螺旋体特异片段,再用Cy3标记引物,通过不对称PCR 获取荧光素标记的靶序列,然后与制备的芯片杂交,扫描仪记录结果.同时,以PCR技术为对照,进一步观察基因芯片技术检测动物传染源中钩端螺旋体的特异性、敏感性及可行性.常规PCR扩增问号钩端螺旋体阳性标本,出现单一482 bp的扩增产物,而双曲钩端螺旋体及其他螺旋体、病原、正常动物组织均无任何 DNA扩增条带,芯片杂交结果与常规PCR方法结果一致.用芯片和PCR对动物组织中不同浓度钩端螺旋体的检测,最低检测浓度分别为10条和100条钩端螺旋体,芯片检测的敏感性高于常规PCR法.用基因芯片与PCR分别对标本进行检测, 5只人工感染的豚鼠肾、肝、心、血等组织的检测结果均为阳性;28份疫区野鼠肾标本阳性结果分别为8份和4份,10份可疑病猪肾标本阳性结果分别7份和5份;5份非疫区野鼠肾、5份正常猪肾标本以及其他微生物的检测结果均为阴性.结果表明,基因芯片技术可快速、灵敏、特异地检测动物传染源中问号钩端螺旋体.
위료장합성적핵산탐침점양도파편상제비성기인심편,선용상규PCR확증동물조직중구단라선체특이편단,재용Cy3표기인물,통과불대칭PCR 획취형광소표기적파서렬,연후여제비적심편잡교,소묘의기록결과.동시,이PCR기술위대조,진일보관찰기인심편기술검측동물전염원중구단라선체적특이성、민감성급가행성.상규PCR확증문호구단라선체양성표본,출현단일482 bp적확증산물,이쌍곡구단라선체급기타라선체、병원、정상동물조직균무임하 DNA확증조대,심편잡교결과여상규PCR방법결과일치.용심편화PCR대동물조직중불동농도구단라선체적검측,최저검측농도분별위10조화100조구단라선체,심편검측적민감성고우상규PCR법.용기인심편여PCR분별대표본진행검측, 5지인공감염적돈서신、간、심、혈등조직적검측결과균위양성;28빈역구야서신표본양성결과분별위8빈화4빈,10빈가의병저신표본양성결과분별7빈화5빈;5빈비역구야서신、5빈정상저신표본이급기타미생물적검측결과균위음성.결과표명,기인심편기술가쾌속、령민、특이지검측동물전염원중문호구단라선체.