免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2008年
3期
332-336
,共5页
陈志瑾%丛延广%周莹冰%侯瑞%胡福泉%饶贤才
陳誌瑾%叢延廣%週瑩冰%侯瑞%鬍福泉%饒賢纔
진지근%총연엄%주형빙%후서%호복천%요현재
毕赤酵母%肽抗生素%hPAB-β%发酵%纯化
畢赤酵母%肽抗生素%hPAB-β%髮酵%純化
필적효모%태항생소%hPAB-β%발효%순화
目的 在成功构建肽抗生素hPAB-β重组毕赤酵母的基础上,深入探讨酵母表达hPAB-β的规模化纯化方法.方法 采用高密度发酵法在3.7L发酵罐中对pPIC9K-hPAB-β/GS115优5重组菌株进行发酵,收集发酵液,依次采用W-UF-II过滤系统超滤、反相层析、阳离子交换、分子筛层析等纯化技术对目标表达产物逐级进行纯化,目的 蛋白用15%的Tricine-SDS-PAGE电泳进行跟踪分析.最终纯化产物的生物学活性用平板琼脂扩散法进行测定.结果 在培养至工程菌菌体湿重约200~250g/L时,以甲醇诱导培养基诱导目的 蛋白表达,48h后菌体湿重达280g/L,目标产物表达量约75mg/L.发酵液经Mr10000膜超滤,达到去除大部分酵母色素和浓缩样品的目的 (体积浓缩约2/3).再经反相层析、离子交换、分子筛层析纯化,最终目的 产物的纯度达98%以上,得率达32.5%.且纯化的目的 蛋白具有良好的杀灭金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的活性.结论 酵母表达肽抗生素hPAB-β经膜超滤、反相层析、离子交换和分子筛层析四步纯化,实现了去除非目的 蛋白、酵母色素及脱盐的目的 ,为规模化制备hPAB-β创造了前提.
目的 在成功構建肽抗生素hPAB-β重組畢赤酵母的基礎上,深入探討酵母錶達hPAB-β的規模化純化方法.方法 採用高密度髮酵法在3.7L髮酵罐中對pPIC9K-hPAB-β/GS115優5重組菌株進行髮酵,收集髮酵液,依次採用W-UF-II過濾繫統超濾、反相層析、暘離子交換、分子篩層析等純化技術對目標錶達產物逐級進行純化,目的 蛋白用15%的Tricine-SDS-PAGE電泳進行跟蹤分析.最終純化產物的生物學活性用平闆瓊脂擴散法進行測定.結果 在培養至工程菌菌體濕重約200~250g/L時,以甲醇誘導培養基誘導目的 蛋白錶達,48h後菌體濕重達280g/L,目標產物錶達量約75mg/L.髮酵液經Mr10000膜超濾,達到去除大部分酵母色素和濃縮樣品的目的 (體積濃縮約2/3).再經反相層析、離子交換、分子篩層析純化,最終目的 產物的純度達98%以上,得率達32.5%.且純化的目的 蛋白具有良好的殺滅金黃色葡萄毬菌和銅綠假單胞菌的活性.結論 酵母錶達肽抗生素hPAB-β經膜超濾、反相層析、離子交換和分子篩層析四步純化,實現瞭去除非目的 蛋白、酵母色素及脫鹽的目的 ,為規模化製備hPAB-β創造瞭前提.
목적 재성공구건태항생소hPAB-β중조필적효모적기출상,심입탐토효모표체hPAB-β적규모화순화방법.방법 채용고밀도발효법재3.7L발효관중대pPIC9K-hPAB-β/GS115우5중조균주진행발효,수집발효액,의차채용W-UF-II과려계통초려、반상층석、양리자교환、분자사층석등순화기술대목표표체산물축급진행순화,목적 단백용15%적Tricine-SDS-PAGE전영진행근종분석.최종순화산물적생물학활성용평판경지확산법진행측정.결과 재배양지공정균균체습중약200~250g/L시,이갑순유도배양기유도목적 단백표체,48h후균체습중체280g/L,목표산물표체량약75mg/L.발효액경Mr10000막초려,체도거제대부분효모색소화농축양품적목적 (체적농축약2/3).재경반상층석、리자교환、분자사층석순화,최종목적 산물적순도체98%이상,득솔체32.5%.차순화적목적 단백구유량호적살멸금황색포도구균화동록가단포균적활성.결론 효모표체태항생소hPAB-β경막초려、반상층석、리자교환화분자사층석사보순화,실현료거제비목적 단백、효모색소급탈염적목적 ,위규모화제비hPAB-β창조료전제.
