遵义医学院学报
遵義醫學院學報
준의의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE ZUNYI
2009年
4期
332-334
,共3页
岳昌武%吕玉红%谢兰%凌锌%莫宁萍%刘坤祥
嶽昌武%呂玉紅%謝蘭%凌鋅%莫寧萍%劉坤祥
악창무%려옥홍%사란%릉자%막저평%류곤상
s-腺苷甲硫氨酸合成酶%融合蛋白%原核表达%Ni2+-NTA柱纯化
s-腺苷甲硫氨痠閤成酶%融閤蛋白%原覈錶達%Ni2+-NTA柱純化
s-선감갑류안산합성매%융합단백%원핵표체%Ni2+-NTA주순화
目的 获取都柏林沙门氏菌metk基因编码8-腺苷甲硫氨酸合成酶His-tag融合蛋白,为基因工程生产s-腺苷甲硫氨酸创造条件.方法 利用都柏林沙门氏菌metk基因特异引物,以都柏林沙门氏菌临床分离株的基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增得到该基因编码区,并构建原核表达重组质粒载体pET30a-metk,经酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达,Ni2+-NTA柱纯化重组蛋白.结果 经IPTG24℃诱导6h后,12%SDS-PAGE电泳检测表明诱导表达的融合蛋白占细菌总蛋白高达40%以上,重组蛋白分子量约为58.8 kDa.结论 成功构建His-METK融合蛋白原核表达载体,并高效表达、纯化、复性,为进一步利用该蛋白奠定了基础.
目的 穫取都柏林沙門氏菌metk基因編碼8-腺苷甲硫氨痠閤成酶His-tag融閤蛋白,為基因工程生產s-腺苷甲硫氨痠創造條件.方法 利用都柏林沙門氏菌metk基因特異引物,以都柏林沙門氏菌臨床分離株的基因組DNA為模闆,利用PCR技術擴增得到該基因編碼區,併構建原覈錶達重組質粒載體pET30a-metk,經酶切鑒定後轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導融閤蛋白錶達,Ni2+-NTA柱純化重組蛋白.結果 經IPTG24℃誘導6h後,12%SDS-PAGE電泳檢測錶明誘導錶達的融閤蛋白佔細菌總蛋白高達40%以上,重組蛋白分子量約為58.8 kDa.結論 成功構建His-METK融閤蛋白原覈錶達載體,併高效錶達、純化、複性,為進一步利用該蛋白奠定瞭基礎.
목적 획취도백림사문씨균metk기인편마8-선감갑류안산합성매His-tag융합단백,위기인공정생산s-선감갑류안산창조조건.방법 이용도백림사문씨균metk기인특이인물,이도백림사문씨균림상분리주적기인조DNA위모판,이용PCR기술확증득도해기인편마구,병구건원핵표체중조질립재체pET30a-metk,경매절감정후전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도융합단백표체,Ni2+-NTA주순화중조단백.결과 경IPTG24℃유도6h후,12%SDS-PAGE전영검측표명유도표체적융합단백점세균총단백고체40%이상,중조단백분자량약위58.8 kDa.결론 성공구건His-METK융합단백원핵표체재체,병고효표체、순화、복성,위진일보이용해단백전정료기출.
