广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2010年
17期
2229-2232
,共4页
卢康荣%刘爱华%王娟%邓鹏%罗海华%钟钦松%钟明明%姜勇
盧康榮%劉愛華%王娟%鄧鵬%囉海華%鐘欽鬆%鐘明明%薑勇
로강영%류애화%왕연%산붕%라해화%종흠송%종명명%강용
S100A8%启动子%基因%报告
S100A8%啟動子%基因%報告
S100A8%계동자%기인%보고
目的 构建小鼠S100A8基因启动子序列的报告基因载体,通过报告基因技术检测在静息、脂多糖(LPS)、PolyI:C及NaASO2等刺激下该段启动子的转录活性.方法 采用PCR从小鼠脾组织基因组DNA扩增S100A8启动子序列(-826～+468);将其克隆至pDsRed1-1载体上,重组质粒经过PCR、酶切及测序分析正确无误后转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,荧光显微镜下观察静息、LPS、PolyI:C和NaASO2刺激下红色荧光蛋白表达.结果 正确扩增出小鼠S100A8启动子片段(-826～+468);成功构建其红色荧光蛋白报告基因载体,证实该质粒转染RAW 264.7细胞后静息状态下仅可见少量而微弱的红色荧光,经LPS、PolyI:C和NaASO2刺激后,红色荧光强度和亮度明显增加.结论 小鼠S100A8启动子(-826～+468)在静息状态下即具有转录活性,炎性、氧化应激刺激后S100A8表达增强;该启动子的成功克隆和其报告基因载体的构建,为进一步研究S100A8的基因表达调控机制打下了良好的基础.
目的 構建小鼠S100A8基因啟動子序列的報告基因載體,通過報告基因技術檢測在靜息、脂多糖(LPS)、PolyI:C及NaASO2等刺激下該段啟動子的轉錄活性.方法 採用PCR從小鼠脾組織基因組DNA擴增S100A8啟動子序列(-826～+468);將其剋隆至pDsRed1-1載體上,重組質粒經過PCR、酶切及測序分析正確無誤後轉染小鼠巨噬細胞繫RAW264.7,熒光顯微鏡下觀察靜息、LPS、PolyI:C和NaASO2刺激下紅色熒光蛋白錶達.結果 正確擴增齣小鼠S100A8啟動子片段(-826～+468);成功構建其紅色熒光蛋白報告基因載體,證實該質粒轉染RAW 264.7細胞後靜息狀態下僅可見少量而微弱的紅色熒光,經LPS、PolyI:C和NaASO2刺激後,紅色熒光彊度和亮度明顯增加.結論 小鼠S100A8啟動子(-826～+468)在靜息狀態下即具有轉錄活性,炎性、氧化應激刺激後S100A8錶達增彊;該啟動子的成功剋隆和其報告基因載體的構建,為進一步研究S100A8的基因錶達調控機製打下瞭良好的基礎.
목적 구건소서S100A8기인계동자서렬적보고기인재체,통과보고기인기술검측재정식、지다당(LPS)、PolyI:C급NaASO2등자격하해단계동자적전록활성.방법 채용PCR종소서비조직기인조DNA확증S100A8계동자서렬(-826～+468);장기극륭지pDsRed1-1재체상,중조질립경과PCR、매절급측서분석정학무오후전염소서거서세포계RAW264.7,형광현미경하관찰정식、LPS、PolyI:C화NaASO2자격하홍색형광단백표체.결과 정학확증출소서S100A8계동자편단(-826～+468);성공구건기홍색형광단백보고기인재체,증실해질립전염RAW 264.7세포후정식상태하부가견소량이미약적홍색형광,경LPS、PolyI:C화NaASO2자격후,홍색형광강도화량도명현증가.결론 소서S100A8계동자(-826～+468)재정식상태하즉구유전록활성,염성、양화응격자격후S100A8표체증강;해계동자적성공극륭화기보고기인재체적구건,위진일보연구S100A8적기인표체조공궤제타하료량호적기출.
