中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2010年
7期
1352-1355
,共4页
许吕宏%方建培%Le Yi%翁文骏%洪冬玲
許呂宏%方建培%Le Yi%翁文駿%洪鼕玲
허려굉%방건배%Le Yi%옹문준%홍동령
黏着斑激酶%基因沉默%白血病%细胞凋亡%REH细胞
黏著斑激酶%基因沉默%白血病%細胞凋亡%REH細胞
점착반격매%기인침묵%백혈병%세포조망%REH세포
目的:本研究靶向黏着斑激酶(FAK)基因,构建FAK-shRNA慢病毒载体,并研究FAK基因沉默对白血病细胞生长的影响.方法:化学合成人FAK基因的shRNA序列,应用分子生物学方法将该FAK shRNA序列插入含荧光素GFP慢病毒质粒.该FAK shRNA慢病毒载体在体外包装、浓缩,然后转染至人白血病细胞株.应用逆转录聚合酶链反应及蛋白质印迹方法检测FAK基因表达水平,予Annexin V标记检测细胞凋亡的情况.结果:经核苷酸序列分析提示FAK shRNA正确插入慢病毒质粒,该病毒载体在白血病细胞株的转染率为10%-25%.与对照组相比(无FAK shRNA的慢病毒载体),FAK shRNA慢病毒载体在细胞FAK mRNA及蛋白水平的抑制率分别为40%和70%.凋亡实验表明,对照组与FAK shRNA慢病毒载体组的Annexin V阳性率分别为(4.19±0.36)%和(8.48±0.58)%,两者差异明显(P＜0.05).结论:我们成功构建FAK shRNA慢病毒载体,该载体能抑制FAK基因表达并诱导白血病细胞凋亡.
目的:本研究靶嚮黏著斑激酶(FAK)基因,構建FAK-shRNA慢病毒載體,併研究FAK基因沉默對白血病細胞生長的影響.方法:化學閤成人FAK基因的shRNA序列,應用分子生物學方法將該FAK shRNA序列插入含熒光素GFP慢病毒質粒.該FAK shRNA慢病毒載體在體外包裝、濃縮,然後轉染至人白血病細胞株.應用逆轉錄聚閤酶鏈反應及蛋白質印跡方法檢測FAK基因錶達水平,予Annexin V標記檢測細胞凋亡的情況.結果:經覈苷痠序列分析提示FAK shRNA正確插入慢病毒質粒,該病毒載體在白血病細胞株的轉染率為10%-25%.與對照組相比(無FAK shRNA的慢病毒載體),FAK shRNA慢病毒載體在細胞FAK mRNA及蛋白水平的抑製率分彆為40%和70%.凋亡實驗錶明,對照組與FAK shRNA慢病毒載體組的Annexin V暘性率分彆為(4.19±0.36)%和(8.48±0.58)%,兩者差異明顯(P＜0.05).結論:我們成功構建FAK shRNA慢病毒載體,該載體能抑製FAK基因錶達併誘導白血病細胞凋亡.
목적:본연구파향점착반격매(FAK)기인,구건FAK-shRNA만병독재체,병연구FAK기인침묵대백혈병세포생장적영향.방법:화학합성인FAK기인적shRNA서렬,응용분자생물학방법장해FAK shRNA서렬삽입함형광소GFP만병독질립.해FAK shRNA만병독재체재체외포장、농축,연후전염지인백혈병세포주.응용역전록취합매련반응급단백질인적방법검측FAK기인표체수평,여Annexin V표기검측세포조망적정황.결과:경핵감산서렬분석제시FAK shRNA정학삽입만병독질립,해병독재체재백혈병세포주적전염솔위10%-25%.여대조조상비(무FAK shRNA적만병독재체),FAK shRNA만병독재체재세포FAK mRNA급단백수평적억제솔분별위40%화70%.조망실험표명,대조조여FAK shRNA만병독재체조적Annexin V양성솔분별위(4.19±0.36)%화(8.48±0.58)%,량자차이명현(P＜0.05).결론:아문성공구건FAK shRNA만병독재체,해재체능억제FAK기인표체병유도백혈병세포조망.
